抗体的新替代品
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Avacta生命科学公司最近投资1000万英镑推出Affimers，这是一种替代抗体的工程蛋白，具有广泛的应用潜力。
为了了解Affimers的一些特点，以及它们如何对研究人员有益，我们采访了Avacta Group plc的首席执行官Alastair Smith。
AM:你能给我们介绍一下Affimers的背景和它们是如何发展起来的吗?
AS:确认子最初是在剑桥的MRC癌细胞组开发的，然后在利兹大学的两个实验室开发。该技术随后由Avacta Group plc通过Avacta生命科学有限公司收购、开发并商业化。
肯定子来源于胱抑素蛋白，并利用两个独立的环序列，包含12至36个随机氨基酸，以创建一个大的潜在目标相互作用表面。我们制作了大量的文库，筛选与目标蛋白质或其他分子高度特异性、高亲和力的结合。
AM:抗体给研究人员带来了许多挑战。你能举一些挑战的例子，以及肯定者如何帮助克服这些挑战吗?
AS:虽然抗体是成熟的亲和试剂，但对于研究人员来说，它们存在许多问题，例如开发周期长，难以表达，难以设计，批量可重复性，很少具有单特异性，无法生成某些靶标(例如那些对宿主动物有毒的靶标)，受动物免疫系统和复杂的IP环境的限制。
确认器的设计就是为了解决这些问题。它们的主要好处是:
•快速开发-定制生成在短短7周，相比6 - 12个月的良好抗体的质量相当
•特异性可以在库屏幕期间进行控制
•体积小、坚固、稳定
•一致的批量重现性
•容易functionalised
•不受免疫系统限制，在体外生成
•不使用动物
•可以冻干运输和储存吗
•简单的许可
•严格的质量保证
•直接替代抗体-无需改变工艺或工作流程
问:适配体和确认体有什么区别?
AS:适体是基于核酸，如DNA。它们在物理上被限制在一个很小的构象范围内，内部键通常需要被打破才能与目标形成键，它们在化学上也被限制在与目标形成键的类型上。它们的高电荷主链会排斥具有类似电荷的靶标，并且它们非特异性地与细胞和组织中自然存在的许多核酸结合蛋白结合，这使得特异性和高背景成为一个问题。此外，核酸对化学物质非常敏感，某些条件使它们容易降解，对某些样品不实用。
相比之下，肯定子是基于具有良好构象的蛋白质，并且通过其氨基酸与靶标进行广泛的化学相互作用，就像抗体一样。afferers支架被设计成生物惰性(即它对大多数人类蛋白质没有亲和力)，在广泛的pH和温度范围内具有生物物理稳定性，使afferers适用于广泛的分析条件。
从商业角度来看，Affimers不容易被逆向工程，Avacta生命科学公司拥有支架的知识产权(IPR)，并获得了所有必要的筛选知识产权。
AM:确认器在许多应用中都有潜力。你能解释一下肯定子在泛素化研究中的作用吗?
AS:泛素化(也称为泛素化)的过程仍然没有被完全理解，并且，由于它与许多疾病的相关性，因此是一个强烈的学术和商业兴趣领域。但在这一领域，帮助研究人员的抗体一直严重短缺。自诺贝尔化学奖因“发现泛素介导的蛋白质降解”而获奖以来的10年里，只有两种泛素结合抗体被成功开发出来。然而，Avacta的科学家们在短短几个月内就生产出了四个Affimers，还有更多的Affimers正在研发中!确认子将打开泛素化研究领域，因为它们将为科学家提供工具，以提出有关泛素化及其在许多疾病中的作用的重要问题。
问:在Western Blots/ elisa中使用确认子有什么好处?
AS:在elisa中，一个主要问题是特异性。抗体很少是单特异性的，这意味着与不相关蛋白质的交叉反应可能会在分析中引起信号，如果标记的二抗非特异性地与正在进行分析的表面结合，也可能出现假阳性。
确定子是根据其特异性在体外选择的，因此它们不太可能与样品中的无关抗原结合。Affimer支架也被设计成在人类样本中没有自然结合伙伴，这意味着假阳性结果的发生率大大降低——这就是我们之前所说的“生物中性”。最后，当固定在任何一种固体载体上时，肯定子都保持功能，并且可以用HRP等酶进行功能化，从而允许进行标准的ELISA格式。
在Western blots中，抗体众所周知的非特异性反应性可能导致假阳性，特别是在探测常见的翻译后修饰时，抗体会在与真正目标相同的位置与蛋白质带交叉反应。假阴性可能是由于构象表位的物理丢失或翻译后修饰掩盖了表位而引起的。
在与客户的最终应用程序相关的应用程序中验证自定义断言。虽然在生物学上不能保证，但我们能够最大限度地找到任何目标的特定粘合剂，通过对混淆目标使用反选择来生成无交叉反应性的western blots的确认子。
有关Affimers的更多信息，请访问www.avactalifesciences.com．
阿拉斯泰尔·史密斯采访了科技网络编辑安娜-玛丽·麦克唐纳。188金宝搏备用
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