自动平行与广泛的代谢物衍生策略覆盖耦合片/ MS数据采集进行定性和定量分析
介绍
多样性代谢物极性和电喷雾电离效率挑战一个方法的发展。化学衍生化作用可以显著提高色谱保留时间和女士的反应。我们提出一个工作流包括一个自动快速并行胺衍生化、酚类、醛类、醇类和酮类其次是广泛的代谢物的定性/定量片/ MS分析等报道。
方法
丹磺酰氯(DanCl) dansyl-hydrazine (Dan-N2H3)和13 c标记类似物被用作衍生代理。样品(49个分析物混合和尿液)derivatized 12 c试剂,标准和13 c标记derivatized评议使用PAL RTC autosampler (CTC分析)。这两个分数混合并注入到column-swtiching LC系统。女士收购进行TTOF6600 (Sciex)使用片收购。
结果
极性代谢物被转换成更多的疏水性产品(DanCl和Dan-N2H3衍生品),使他们在反相液相色谱分离。试剂的存在基本p-amino组增加电喷射反应因素的10至200倍。主要醇类、酚类、初级和二级胺derivatized DanCl和Dan-N2H3变换酮和醛腙。自动平行衍生化使可再生的衍生化在一个工作流包括光标签样本和沉重的13 c标记的代谢物在15分钟的LC分析前面的示例。碰撞诱导解离生成特定分析物的碎片和轻、重derivatized分析物和标签(XIC m / z = 171和m / z = 173)。LC-SWATH /女士收集所有前体和碎片允许相对和绝对的筛选和量化(n = 45)尿液的代谢物。
结论
标记试剂使胺生成适当的标准,酚类、醛类、醇类和酮类。自动化是关键reproduciblility之前LC和执行在线分析。在一个批处理,样品制备和样品分析覆盖导致显著增加。丹磺酰氯和dansyl-hydrazine被发现适合轻/重标签,提高LC保留,改善响应女士和MS / MS标签。
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