用于下一代测序的改进小RNA文库制备工作流

下一代测序(NGS)用于分析microRNA (miRNA)，一类小的非编码rna，是重要的治疗靶点和诊断标志物。市售的小RNA测序文库制备试剂盒需要大量输入(>100 ng)和费力的凝胶纯化步骤。此外，商业试剂盒受到接头二聚体形成的阻碍，其中5'和3'接头结扎时没有插入RNA。在PCR过程中，适配器二聚体优先扩增。在低RNA输入时，这种情况会加剧，其中适配器二聚体的形成会大大减少可用的测序读数。

我们描述了一个优化的工作流程，该工作流程抑制了适配器二聚体，使用低RNA输入并消除了凝胶纯化步骤的需要。我们的工作流程引入了化学修饰的适配器，可以有效地形成库，同时减少适配器二聚体的形成。TriLink改进的适配器工作流程允许RNA输入低至1ng，当凝胶纯化时，适配器二聚体读取不到1%。此外，当我们的工作流程与基于珠子的尺寸选择净化相结合时，自动化成为可能。