细胞培养的文化:小心不要污染!
在体外细胞培养是一个基础和生物医学研究的重要方面。细胞培养很容易和快速用来测试的假设,收集初步数据之前更费时在活的有机体内实验。它也是一个有用的检测工具,例如药物屏幕或遗传实验,由于易于扩展和高吞吐量的顺从。细胞培养研究的重要性不能被低估。然而,它常常被视为更重要或决定性的序曲在活的有机体内实验。尽管这种印象,它仍然是赋予严密性和护理的关键在体外实验中,将作为未来实验的基础。因此,它是至关重要的应用最高标准细胞培养技术。研究人员必须考虑许多因素在体外实验。选择最合适的细胞系或主要文化项目仅仅是第一步。研究人员必须保持警惕,防止污染文化,从最初的时刻连续镀和整个段落。
文化污染
文化污染的一个来源是无意引入另一个细胞系由于贫穷的实验技术或人为错误。“这是癌症研究的真正关心,”解释Vivekan Nand Yadav,博士是一个系的研究人员在儿科神经胶质瘤Pediatrics-Hematology /肿瘤学密歇根大学。这些所谓的“有很多实例 有问题的细胞系 ,成为污染的另一个细胞系,而原始。“一个著名的和有问题的细胞系是众所周知的原因 海拉 细胞系,源自积极的宫颈腺癌。海拉细胞增殖水平如此之高,以至于他们可以被污染的文化。“重要的是跟踪这些问题细胞系瘟疫生物医学研究和混淆的研究结果,“Yadav说。“数据库是一个很好的资源,如 Cellosaurus 页面,哪些主机专用问题细胞系 污染或被认错 。另一个很好的实践是报告研究资源标识符( RRIDs )细胞株用于任何出版物。RRIDs是生物资源的惟一标识符,包括细胞系和开发促进生物医学研究的再现性和透明度。”
细胞培养也可以成为污染的种类的微生物,如细菌或真菌。“你马上就会知道当你有细菌污染在你的文化中,“Yadav说。“他们通常非常明显,气味和成长如此之高,以至于他们把你的文化媒体多云。真菌污染可通过显微镜检查。酵母和丝状真菌出现明亮的卵形的或纤维,分别。一个非常糟糕的霉菌感染也会看到。对细菌和真菌的问题,你必须抛弃文化在这一点上,适当地通过生物危害,清洁房间,文化检查股票的解决方案和扔掉任何污染,建议Yadav,重新开始。”
他继续说道:“更为阴暗的问题是支原体,这是一个普遍的问题这是难以检测。”。支原体最小的自我复制的微生物,细菌的细胞壁的一种,可以采用许多形状,掩饰他们的文化。“支原体劫持从培养细胞营养,可能会影响他们的成长,基因表达和细胞状态。这是一个问题进行研究。例如,在我的项目,我调查机制肿瘤的重组和药敏在成人和儿科神经胶质瘤。这些细胞支原体可以影响的属性,这将使数据的解释是不可能的。因此,我总是确保我的文化是免费的从污染支原体之前完成我的实验。”
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容易识别的问题
的质量研究,警惕是必要的。“你需要花时间来验证你的细胞系在开始一个项目之前,“建议Zsolt g . Venkei博士研究科学家怀特黑德生物医学研究所,剑桥。“这是尤其重要的,当使用一个细胞系是新的实验室,这个细胞系的过程 身份验证 可以表现在很多方面。最简单的方法,它应该被整合到细胞培养常规,是快速可视化微观检查 形态 。这是一个粗糙的方法,因为细胞系形态并不是唯一的;然而,改变形状可以提醒污染问题。我认为最好的方法 短串联重复序列 相匹配的分析、pcr测定细胞的变量微卫星DNA档案数据库。但是其他基因组方法也很有用,例如 核型分析和拷贝数变异 如通过 G-banding和荧光原位杂交 (鱼)”。
Venkei利用 果蝇 作为研究模型和工作 昆虫细胞培养 。 细胞系来源 ,物种和组织细胞的起源,是身份验证过程的另一个重要方面。“当你正在进行研究,试图回答问题在一个特定的生物模型或细胞系。一种测试出处,是执行 同工酶 分析验证物种起源和生物标记物的免疫细胞化学 组织起源 ,”他解释道。“这样,你的真实性验证细胞系,并确认它维护你需要解决你的研究问题的特点。”
“过去的身份验证过程,现在必须确保没有微生物污染你的文化你通过它进行实验,“Venkei说。“微生物污染范围从明显的细菌和真菌,是可见的,通过眼睛或显微镜下,支原体,不离开容易可认识的视觉符号。支原体通常很难发现显微镜,通常是检测到PCR等分子技术,和鱼,这应该遵循常规的时间表,因为有限的视觉标志,提醒有可能的污染。最后,病毒是有些棘手。有些病毒诱导细胞病变效应、形态变化、视觉检测。其他人可能只是整合到宿主细胞的DNA而不影响细胞形态,在这种情况下,PCR等分子测试是必需的。”
细胞培养的最佳实践与Incellis Confluency计算
细胞confluency应用与精度是一个重要的技术,因为它是一个昂贵的过程,需要从第一次尝试最大的转染效率。这是一个过程,一个示例分析了空间被细胞的观察——这可以通过利用血细胞计数器被放大和染料如锥虫蓝,但是这些额外的步骤需要更多的工作。贝尔坦公司技术已经开发出一种新方法,使使用更方便细胞confluency。下载这个白皮书发现如何“刮”的细胞迁移试验方法措施在体外以及一种新型细胞成像系统如何提供具有成本效益的、高特异性的结果。
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防止问题先发制人
几乎所有的污染问题可以最小化通过实施适当的安全措施。“第一个措施可以在文化本身,“Venkei解释道。“确保你使用无菌plasticware或消毒过的玻璃器皿,包括抗生素和抗真菌的培养基,并检查每天的文化。总是要特别警惕新的细胞系获得实验室。检查支原体,因为一旦污染,很难 根除 ,”Venkei警告说。接下来的措施,以确保一个清洁的工作环境。总是在层流罩工作;按照说明腰带级别,不阻碍流动使通风孔罩和覆盖。确保层流罩过滤器经常维修和更换。Venkei阐述了一些关键的保障措施:“ 净化 罩的紫外线,所有设备将用70%的乙醇。确保你存储你的文化的孵化器经常清洗。当你工作时,遵循良好的移液技术,防止烟雾化和减少传播。穿实验服、戴上手套,尽可能多的保护自己的文化。”
一般来说,防止污染比消除持久性污染更简单,这需要更极端的措施,如丢弃文化和开放媒体,抗生素/抗真菌的,和血清瓶。珍贵的或不可替代的文化 打捞 ,但需要特别的照顾。“这是一个很多步骤,很多措施,大量的工作。但有必要保持质量细胞培养,无污染,并确保你的研究的完整性,”Venkei总结道。
