PatchXpress 7000A自动膜片钳系统的快速溶液交换和配体门控通道研究

摘要

PatchXpress®7000A膜片钳系统是一种自动化电生理工作站，允许用户提高研究质量记录的吞吐量，并测量几乎任何通道类型的离子通道活动。AVIVA生物科学公司独特的SealChip™平面电极和PatchXpress流体系统支持高质量的膜片钳记录电压门控和配体门控离子通道。

该系统使用机器人移液器将配体和药物直接输送到全细胞配置的修补细胞中。每个孔中的配体冲洗是通过在靠近记录孔的底部使用一对专用灌注尖端来实现的，以便在细胞附近进行快速流体交换。

为了量化配体和药物加入的速度，我们利用内源性表达向内整流K通道的RBL细胞，改变外部钾[K+]的浓度，在PatchXpress 7000A系统上研究了液体交换速率。从低到高[K+]以指数时间过程增加电流，单个时间常数为19±11 ms。用独立洗涤站冲洗高[K+]的时间常数为420±281 ms。

我们用表达配体门控通道的细胞进一步测试了该系统，包括内源性表达ph敏感ASIC通道的HEK细胞以及异源表达GABAA受体的L-tk细胞。许多配体已经成功地在细胞/通道类型上进行了测试。记录了配体、特异性激动剂和拮抗剂与通道的相互作用。

配体(GABA)完全洗净容易获得独立的洗涤站。我们的研究结果表明，流体输送系统的特性以及新添加的配体和药物输送精确定时的软件功能，使PatchXpress 7000A平台适用于广泛的配体门控离子通道研究。