提高Western Blot负载控制可靠性的方法:无染色总蛋白定量

本应用说明比较了通过无染色总蛋白测量以及三种家务蛋白质(ß-actin， ß-tubulin和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的免疫检测测量的一系列稀释的线性关系。我们发现，基于免疫检测的ß-actin、ß-tubulin和GAPDH蛋白水平的测量既没有表现出良好的线性关系，也不能准确地指示10-50 μg HeLa细胞裂解液负荷水平。相比之下，在相同的负载范围内，无染色总蛋白测量显示出很大的线性，其线性与选择低丰度蛋白靶点的免疫检测相关:MEK, Akt和Erk。该研究表明，与常规蛋白质相比，无染色总蛋白测量是一种更可靠的加载控制，特别是在细胞裂解液常用的加载范围(10-50 μg)内。