具有广泛代谢物覆盖的自动化并行衍生化策略与SWATH/MS数据采集相结合，用于定性和定量分析
介绍
代谢物极性和电喷雾电离效率的多样性对单一方法的发展提出了挑战。化学衍生化可显著提高色谱保留时间和MS响应。我们提出了一个工作流程，包括胺类、酚类、醛类、醇类和酮类的自动快速平行衍生化，然后进行QUAL/QUANT SWATH/MS分析，以广泛覆盖代谢物。
方法
丹酰氯(DanCl)、丹酰肼(Dan-N2H3)及其13C标记类似物用作衍生剂。样品(49种分析物混合物和尿液)用12C试剂衍生，标准品用13C标记试剂衍生，使用PAL RTC自动进样器(CTC Analytics)。将两种组分混合并注入到色谱柱切换LC系统中。在tof6600 (Sciex)上使用SWATH采集进行MS采集。
结果
极性代谢物被转化为更疏水的产物(DanCl和Dan-N2H3衍生物)，使它们能够在反相液相色谱上分离。两种试剂上都存在一个碱性对氨基，使电喷雾反应系数增加10到200倍。主醇、酚、主胺和仲胺都与danl衍生，Dan-N2H3将酮和醛转化为腙。自动化并行衍生化在单一工作流程中实现了可重复的衍生化，包括样品的轻标记和代谢产物混合物的重13C标记，在之前样品的LC分析过程中只需15分钟。碰撞诱导的解离产生针对分析物、轻、重衍生化分析物和标签的特定片段(XIC m/z=171和m/z=173)。LC-SWATH/MS收集了所有前体和所有片段，可以对尿液中的代谢物进行筛选和相对和绝对定量(n=45)。
结论
标记试剂能够生成足够标准的胺、酚、醛、醇和酮。自动化被发现是重现性的关键，并在LC分析之前在线执行。在批处理中，样品制备和样品分析是重叠的，从而大大增加了时间。丹酰氯和丹酰肼被发现是理想的轻/重标记，改善LC保留，改善MS反应和MS/MS标记。
广告
