对一个统一的生物物理表征平台:结合动态光散射和拉曼光谱来确定蛋白质结构和稳定性

相结合的动态光散射(DLS)和拉曼光谱能够描述丰富的化学结构和物理参数的治疗性蛋白质。拉曼光谱同时获取蛋白质二级结构标记(酰胺我和III)和三级结构标记(芳香族侧链、二硫键、氢键本地疏水性)。这些标记可以监控受控条件下测定的光谱峰值的位置,形状,和/或强度。拉曼能够使这些结构在配方浓度决定,50毫克/毫升或更高版本,而不是在传统的方法所需的稀释浓度,即通常小于几毫克/毫升圆二色性(CD)。

DLS使用后向散射检测能够测量蛋白质在高浓度的水力半径(超过50毫克/毫升)。这项技术是基于光散射,散射强度与r6尺度,是敏感的聚合物的形成。因此,改变大小分布和多分散性的函数各种扰动(温度、pH值、盐浓度,等等)可以监控,使推导过程的蛋白质相互作用和动态信息,即kD、弛豫时间。

这两种技术结合成一个单一的系统允许的测量大小和结构相同的条件下从一个小体积样品。这种结合方法的独特之处在于,它可以显示,例如,如果一个蛋白质结构改变了然后聚合,聚合没有结构性变化,或改变结构和保持un-aggregated。因此能够提供有用的见解聚合形成的机理。