一个通用的自动化荧光测定甲基转移酶的活动

文摘

表观遗传在药物发现过程吸引了相当大的关注他们的基本角色控制正常细胞发展和贡献疾病变得更加明确。甲基化是一种已知的无处不在的共价修饰参与监管的不同种类的生物分子。组蛋白甲基化是与某些疾病有关,包括许多癌症类型,组蛋白甲基转移酶(hmt)是特别感兴趣的药物靶点。大规模筛选(高温超导)准备好,普遍的甲基转移酶活性测定是最近开发的基于竞争的荧光偏振immunodetection腺苷酸(AMP),形成的甲基转移酶(MT)反应产物S-adenosylhomocysteine (SAH)在双酶耦合步骤。

这里我们演示试验的自动化以384孔酶标格式适合高温超导。8路和单通道仪器被用于自动化液体处理组蛋白甲基转移酶(HMT) G9a滴定和传输试验板一式四份。自动连续稀释和转让的HMT抑制剂sinefungin也使用液体处理器的执行摘要。在HMT EC80决心,辅因子、基质、停止缓冲和检测试剂添加自动化使用非接触式自动售货机。调剂EC80 HMT酶的浓度和所有试验组件时自动HMT抑制剂IC50决心。G9a的EC80决心为大约80 ng / mL,用于后续的抑制研究,而sinefunginμM IC50值确定为14.5,显示良好的相关性与出版的价值观。