微量热法作为结构生物学的一个工具

复合物的结晶(蛋白质/蛋白质,蛋白质、核酸、蛋白质/配体,核酸/核酸,核酸/配体),即使在良好的生物系统,往往是乏味的和样品时间或消费。

复杂结晶的成功率可以显著改善如果适当的初步表征复杂的使用生物物理方法执行。它建立了动态光散射(DLS)是评价样本可结晶性的关键。同样,DSC thermofluor-based优化策略开发促进蛋白质/配体结晶。等温滴定量热法(ITC)是“黄金标准”技术为研究分子相互作用和我们在这里显示,它可以是一个有价值的技术来提高配合物的结晶。ITC是真正的在溶液中直接提供技术,在一个实验中,两个分子之间的完成概要绑定:亲和力(Ka)、焓和熵的变化(ΔH和ΔS)和两个分子之间的化学计量学(N)得到了非常准确。ITC对其他类似的生物物理方法的主要优势是,它是不受限制的高分子或低大小上限,没有缓冲的限制,结构研究最重要的是,它不需要任何标签。此外,我们最近发现,现代ITC装置和新加工方法还允许获得一个完整的动力学描述比通常认为的更加多样化的系统,从简单的配体结合到复杂的RNA折叠。

ITC的主要限制是相对大量的示例所需的一个实验。不过这应该不是一个瓶颈结构生物学家涉及到核磁共振或x射线晶体学研究从样本要求非常类似于ITC分析。因为样品没有损坏在ITC实验,它可以恢复和集中为后续crystallogenesis实验。最后,ITC还可以用来评估核酸或蛋白质的正确折叠在一个复杂的使用。我们在这里将这些ITC-guided结晶的一些示例。所有的实验都进行Microcal™iTC200(莫尔文仪器有限公司)。