DNA聚合酶技术的十年创新

Thermo Scientific Phusion高保真DNA聚合酶目前正在庆祝其成立10周年。我利用这个机会赶上了赛默飞世尔科学公司，了解了更多关于这些高保真DNA聚合酶的知识。

AB对于我们的读者可能没有听说过Phusion这个名字，你能告诉我更多关于这个系列的信息吗?

Fisher热:十年前，芬兰的一个团队成功地开发了一种非常强大的DNA聚合酶，其错误率比传统的低50倍Taq聚合酶。该酶是基于独特的融合蛋白技术开发的，旨在提高PCR效率并找到解决PCR局限性的方法。融合蛋白技术由两个组成部分融合在一起，一个是加工因子(一种嗜热、非特异性的双链DNA结合蛋白)，另一个是校对DNA聚合酶。除了预期的可靠读长增加外，该PCR酶还表现出许多其他理想的特性，包括增加的保真度(超过52倍)TaqDNA聚合酶)，抵抗各种PCR抑制剂和更快的整体性能。该酶使许多PCR应用程序的流线型化，今天仍然领先于高保真PCR市场。

在过去的十年中，Phusion产品系列已经发展到包括独立酶，主混合物和热启动酶，所有这些都有一个可见的绿色缓冲液，可以直接将反应产物装载到凝胶上。这些融合酶可以创建直接PCR协议，用户根本不需要纯化DNA;这意味着样品(植物、动物组织或血液)可以直接放入PCR混合物中进行扩增。

阿瑟:Phusion为研究人员提供了哪些关键功能?

Fisher热:

•极高的保真度-比常用的高52倍TaqDNA聚合酶。这使得研究人员能够以极低的序列错误机会生成PCR产物。
•长扩增-更高的加工酶，使产品的产生高达20 kb。
•快速扩增-允许用户显着减少PCR循环时间
•抵抗抑制剂-允许用户甚至放大次优纯度的模板

阿瑟:Phusion是否促成了任何值得注意的研究?

Fisher热:Phusion旨在简化扩增过程，减少序列错误的数量，并有效地处理具有挑战性的模板。融合通常在协议的优化和推进阶段使用，而不是在新方法开发的开始。然而，有大量的小组已经使用Phusion来完成他们的初始项目，因为他们无法达到标准聚合酶的必要技术灵敏度水平。事实上，我们很高兴地看到，我们的高保真Phusion酶使Inostics的一个团队能够开发出一种名为BEAMing的技术。这项技术的独特之处在于，它可以灵敏地检测到ctDNA中的罕见突变，从而促进癌症的研究和诊断。

阿瑟:你们最近推出了Phusion Green高保真DNA聚合酶，扩大了产品范围，该产品如何补充现有的产品范围?

Fisher热:我们的客户越来越希望在工作流程的每一步都能节省时间、材料和成本。为了帮助研究人员实现这些节省，我们为我们的Phusion产品提供包含电泳跟踪染料和密度试剂的缓冲溶液。这使我们的客户能够从他们的工作流程中删除许多步骤，例如在运行凝胶之前需要购买染料及其随后在移液步骤中的使用。简单地说，PCR产物可以在循环后直接装载到凝胶上。我们的客户喜欢这样。

阿瑟:最后，你能告诉我更多关于什么他妈的Phusion的前景如何?

Fisher热:与所有其他校对酶一样，融合DNA聚合酶对dUTP不耐受，dUTP是一种经过亚硫酸转化等特定过程后出现在DNA中的非天然核苷酸。因此，我们的一些客户将受益于Phusion U，这是一个即将推出的Phusion的新变种版本。Phusion U将能够容忍DNA模板中的dUTP，并能够将dUTP纳入使用UDG进行污染转移等技术。

即使没有额外的增强功能，新客户也继续在他们的新应用中使用Phusion高保真DNA聚合酶。我们相信，在未来的许多年里，我们的Phusion技术将会受到需求。

有关Phusion高保真DNA聚合酶和Phusion Fest的更多信息，请访问www.thermoscientific.com/phusion

赛默飞世尔接受了技术网络总编辑阿什利·博德的采访。188金宝搏备用你可以找到阿什利谷歌+并继续关注科技网络188金宝搏备用推特．