色谱法，特别是高效液相色谱法(HPLC)，多年来已被证明是分析实验室的宝贵工具。从食品分析，到环境测试和药物安全，HPLC都发挥着至关重要的作用。然而，尽管这是一种“成熟”的技术，但仍有一些领域存在问题，导致不理想的结果。
其中一个领域是色谱过程中分析物的损失。这源于样品中的分析物与设备中存在的金属表面之间发生的相互作用。我们采访了沃特斯公司的Amit Patel、Kim Haynes、Kerri Smith和Martin Gilar，讨论了HPLC过程中分析物丢失的挑战、导致的问题以及该领域的创新如何帮助克服这些问题。
问:自高效液相色谱分离开始以来，由于分析物的结合和吸附导致的分析物损失一直是一个问题。这个问题对分析结果有什么影响?
答:自高效液相色谱出现以来，我们已经看到了许多技术和方法策略的进步，以减轻表面金属吸附的色谱效应;这是许多产品目录和期刊文章的主题，也是常规实验室实践的焦点。在最好的情况下，非特异性分析物的结合和吸附会导致峰形的恶化和峰面积的损失，而在最坏的情况下，会出现较差的分析-分析精度或总峰损失。此外，金属结合的程度随着色谱技术的不同而不同，并且由于不同有效的掩蔽措施而被放大，从而阻碍了结果的解释。
问:沃特斯为应对这一挑战采取了哪些措施?
答:Waters开发了一组名为MaxPeak™高性能表面(HPS)的技术，其目标是减少由于分析物/表面相互作用造成的样品损失。其中之一是有机-无机混合表面化学，以帮助解决液相色谱中分析物-金属表面相互作用的挑战。这项技术是基于乙烯桥接硅氧烷化学。它在样品和系统和柱的金属表面之间形成一个屏障最大限度地减少金属基吸附，提高再现性，简化方法开发，提高灵敏度和峰形状。它还消除了表面钝化的需要，钝化是通过酸处理等方法去除自由金属离子的过程。沃特世公司采用MaxPeak HPS技术的新型色谱柱和系统均带有PREMIER品牌名称。
问:与其他解决方案相比，PREMIER解决方案的区别或优势是什么?
答:Waters™ACQUITY PREMIER™解决方案的优势取决于我们与哪些替代方案进行比较。具有流动相的螯合剂的使用就是一个例子。其他例子包括反复注入样品以占据金属表面的活性位点的表面调理和样品衍生化以改变分析物以规避静电相互作用。这些变通过程中的每一个都将额外的步骤引入工作流，从而不必要地使分析复杂化。这些解决方案提供了暂时的好处，引入了污染的可能性，在某些情况下会导致LC-MS分析的离子抑制。
除了替代方法来抵消非特异性吸附，这一挑战的一些解决方案包括使用色谱柱和系统组件表面的替代材料。其中一种是聚醚醚酮(PEEK)。虽然PEEK可以有效减少金属基的相互作用，但它只能在较低的操作压力下使用，并且容易被二甲基亚砜(DMSO)和四氢呋喃(THF)等流动相溶剂膨胀。
使用Waters ACQUITY PREMIER溶液，可以在第一次注入时就获得尖峰和更大的峰容量，而不需要复杂的流动相添加剂(如螯合剂)或耗时的钝化和表面处理。
问:你能举几个性能改进的例子吗?
答:ACQUITY PREMIER溶液旨在通过反相和亲水相互作用色谱分析有机酸、有机磷酸盐、寡核苷酸、磷酸肽、酸性聚糖和磷脂时，缓解分析物/金属表面相互作用的问题。
在分析柠檬酸和异柠檬酸时，使用ACQUITY PREMIER CSH苯己基色谱柱与传统CSH苯己基色谱柱相比，在等效分析条件下产生了更大的峰面积(图1)。这些三羧酸(TCA)循环分析物含有已知能与金属结合的羧酸基。当使用ACQUITY PREMIER柱防止这些相互作用时，观察到深刻的色谱性能差异。
图2: 条形图显示了常规柱和ACQUITY PREMIER柱的性能，其中包括前三次样品注射的值，以及500 pmol 15-35 mer低聚脱氧胸苷标准注射后的条件，然后是10 pmol标准注射。样品注射为2 μ L 10 pmol的寡核苷酸标准注射在柱上。在这些测量中使用的柱是BEH C的标准和ACQUITY PREMIER版本18寡核苷酸(2.1 × 50毫米，1.7 米 米)。资料来源:沃特斯公司。
MaxPeak HPS技术的另一个优点是减少了对表面处理的需求。在分析易被金属表面吸附的样品之前，从业人员经常对样品进行多次注射，作为调节步骤。如图2所示，常规色谱柱需要多次注入才能使活性吸附位点饱和，并获得一致的样品信号。寡核苷酸属于一类分析物，其表面吸附可以影响回收率和峰面积计数。在这里，我们演示了当使用ACQUITY PREMIER色谱柱而不是传统色谱柱时，不需要表面调节来实现可重复的信号。
问:你认为这项技术未来的发展前景如何?
答:液相色谱仪器和色谱柱主要由金属制成，这对峰的形状、分析物的回收率和再现性有负面影响。在化学测量过程中，不期望的结合和吸附的普遍性和严重性是不可否认的，这突出了MaxPeak HPS的价值带给分析物回收率，分析到分析的可重复性，分离科学家在定性和定量分析结果的完整性方面有更高的保证。
高级科学家Amit Patel博士、首席产品营销经理Kim Haynes博士、首席科学家Kerri Smith博士和首席科学家Martin Gilar博士与技术网络高级科学作家Karen Steward博士进行了交谈。188金宝搏备用
