解决AAV生产的挑战
腺相关病毒(AAV)载体是一种多功能和有吸引力的基因治疗传递平台，能够针对广泛的细胞类型。然而，AAV必须在生命系统中产生，到目前为止，可扩展性和高生产成本的问题限制了该技术的广泛采用。
188金宝搏备用采访了赛默飞世尔科技公司副产品经理Emily Jackson-Holmes博士，了解更多关于AAV载体的好处以及人们对其使用兴趣日益浓厚的原因。在采访中，Jackson-Holmes还解释了Gibco™AAV- max生产系统如何帮助克服与AAV生产相关的挑战，并确保符合法规要求。
安娜·麦克唐纳(AM):为什么人们对AAV载体如此感兴趣?是什么让它们成为基因治疗的理想选择?
艾米丽·杰克逊-霍姆斯(EJ):AAV载体是一种有吸引力的、被广泛应用的基因治疗选择，三种已获批准的基因疗法(Luxturna、Zolgensma和Glybera*)和许多其他正在开发中的基因疗法都证明了这一点。具体地说,为在活的有机体内作为基因疗法的载体，AAV载体的使用有几个原因。由于AAV是不整合的，它比慢病毒(LV)更适合在活的有机体内应用于基因治疗，同时具有较低的免疫原性。此外，AAV不仅可以转导分裂细胞和非分裂细胞，而且可以通过不同的天然和合成或混合血清型靶向特定的细胞和组织类型。
AM:在制造AAV载体时遇到的一些主要挑战是什么?
EJ:生产力、成本和可伸缩性一直是该领域的主要挑战。当考虑到治疗具有大量患者群体的疾病所需的病毒载体数量时，低生产率尤其是个挑战。传统上，对于哺乳动物细胞中AAV的生产，已经使用了黏附的HEK293系统。这些需要向外扩展，以扩大病毒载体的产量，这反过来又需要一个大的足迹。HEK293细胞的悬浮适应性使基于悬浮的AAV生产得以实现，这更适合于缩放。最后，另一个关键挑战是缺乏适合用途和符合法规的试剂，从而实现商业化。这方面的例子包括使用含有致癌SV40大T抗原的细胞和使用含血清的试剂，这两者都存在安全问题。
AM:最常用的转染方法是什么?瞬时转染的优点是什么?
EJ:产生AAV最常见的方法是在HEK293细胞中瞬时转染质粒DNA。在无辅助的瞬时转染中，细胞被三种质粒转染，这些质粒提供了rep和cap基因，转基因和提供了辅助病毒功能的基因。使用瞬态转染的主要优点是通用性和速度。
AM:你能告诉我们更多关于Gibco AAV- max生产系统的信息吗?它如何帮助解决AAV生产的挑战?
EJ:AAV-MAX系统是一个完整的基于悬架的AAV生产系统。该系统通过在化学定义的无动物源性培养基中克隆293f来源细胞系的高密度悬浮培养实现了高AAV滴度。使用一种脂质纳米颗粒转染试剂和一种新型生产增强剂进行无辅助三重转染。该系统的每个组件都经过优化，可以一起工作，在简化的工作流程中实现高滴度，无需优化试剂和协议。为了使该系统的用户能够轻松地从研究用途扩展到临床和商业用途，该系统被设计为从摇瓶扩展到生物反应器，并且试剂符合用途和法规要求。
AM: AAV-MAX系统试剂不含动物源性。为什么这很重要?
EJ:在基因治疗领域，快速推向市场是非常重要的。这方面的一个关键方面是确保在研究阶段最初使用的AAV生产系统在选择时考虑到临床和商业用途，包括选择符合监管要求的试剂。使用不含动物来源的试剂降低了病毒污染物的风险，并减少了批次与批次之间的可变性。
AM:细胞和基因治疗开发者面临哪些监管问题?AAV-MAX生产系统如何解决这些问题?
EJ:如前所述，选择适合用途和法规友好的试剂可确保顺利过渡到临床和商业生产。AAV-MAX系统使用克隆HEK293细胞系，该细胞系缺乏T抗原，包括所有动物来源的试剂。此外，为了补充我们目前可用的研究用途(RUO) AAV-MAX系统，我们将在明年推出我们的Gibco™细胞治疗系统(CTS™)版本的AAV-MAX。我们的CTS版本提供了记录在案的细胞系，gmp级试剂，广泛的安全测试和法规文件。总之，这些有助于基因治疗开发者最大限度地降低风险，并支持他们的监管文件。
Emily Jackson-Holmes接受了科技网络科学作家Anna MacDonald的采访。188金宝搏备用
