| 检测化学可用 | 时间结果(从细胞裂解qPCR结果) | 工作范围 | 基因表达的敏感性 | |
|---|---|---|---|---|
| Cells-to-CT两步包 | SYBR绿色*和TaqMan* *格式 | 2小时 | 10 - 100000个细胞 | 中等到高水平的定量 |
| Cells-to-CT互译工具 | SYBR绿色*和TaqMan* *格式 | 35 - 85分钟 | 10 - 100000个细胞 | 中等水平的定量 |
| 快速先进Cells-to-CT两步包 | SYBR绿色*和TaqMan* *格式 | 80 - 95分钟 | 10 - 100000个细胞 | 中等到高水平的定量 |
| CellsDirect工具包 | TaqMan* *格式只 | 奖金的最小值 | 1 - 10000细胞 | 高水平的定量 |
| 单一Cell-to-CT工具包 | TaqMan* *格式只 | 3人力资源 | 1 - 10细胞 | 高水平的定量 |
CellsDirect qPCR工具包提供高度敏感的和具体的,实时qPCR结果直接从细胞,而不需要一个RNA净化一步测试时每反应至不到10000个细胞一个细胞。CellsDirect技术是专为最大灵敏度小样本(图1)。
图1所示。CellsDirect qPCR工具包提供敏感检测单个细胞。海拉细胞细胞溶解和resuspended CellsDirect协议。十倍系列稀释的细胞溶解产物是由10000个细胞一个细胞。RRKCA,低丰度的目标是发现使用TaqMan探针与CellsDirect互译qPCR与火箭在7700年ABI棱镜仪器装备。效率来衡量的标准曲线(图中未显示)R²= 0.998 97%。
CellsDirect互译qPCR包结合灵敏度和最高水平的便利和吞吐量。与CellsDirect互译包,把你的细胞溶解产物直接qPCR反应混合物,把它放在你的实时仪器,走了。这些包是理想的基因表达分析的样本收集使用LCM (图2)。
图2。CellsDirect互译qPCR工具包提供敏感模块样品的结果。CellsDirect RNA LCM显示样品的净化互译工具足够敏感的捕捉数据不到100个细胞。
跳过RNA净化完全与快速先进Cells-to-CTKits-going直接从培养细胞样本测量相对基因表达与实时rt - pcr (RT-qPCR)。以一种独特的方法溶解培养细胞,去除基因组DNA (gDNA)和保留RNA的完整性,套件包含逆转录(RT)互补脱氧核糖核酸合成试剂和TaqMan或SYBR绿色主混合实时PCR分析。
快速先进Cells-to-CT两步包是更快和更方便的使用比传统的RNA净化灵敏度的前提下(图3)。由于工作流lysate-based,没有失去与Cells-to-C RNAT板。在传统的RNA净化,少量的RNA总是输给了不完全洗脱的过滤器或磁珠。因此,能够在低输入细胞样品中检测出罕见的rna(10 - 1000)与Cells-to-C样品处理时高T包比较结果与样本使用RNA净化工作流(图4)。这一点,加上停止解决方案的好处,给Cells-to-CT工作流的敏感性比竞争对手包检测丰富和低成绩单副本。
图3。灵敏度的先进Cells-to-C TaqMan快T装备比其他包。104细胞细胞溶解后每个设备的协议。的最大溶解产物被添加到每个工具包的Cells-to-C RT (45%T和快速先进Cells-to-CT包;其他供应商)为10%。然后加入一定量25%的RT qPCR TaqMan数组的磷酸二酯酶的反应,使用每个工具的qPCR掌握混合。快速先进Cells-to-CT装备进行平均0.5摄氏度T比原Cells-to-CT装备和3.6摄氏度T比另一个供应商的工具包(11 x比其他供应商更敏感)。
图4。检测的比较。104HepG2细胞细胞溶解后每个设备的协议。的最大溶解产物被添加到每个工具包的Cells-to-C RT (45%T和快速先进Cells-to-CT包;其他供应商)为10%。25%加入一定量的RT qPCR反应为其他供应商的设备;30%是添加到先进Cells-to-C qPCR反应的快T装备,45%添加到权力SYBR工具包。化验10个不同的基因。大多数的基因没有发现在这个细胞系。的基因检测,快速先进Cells-to-CT装备有较低的CT值比其他工具对于大多数基因。
Cells-to-CT包提供一个完整的工作流实时RT-qPCR分析直接从培养细胞RNA净化。以一种独特的方法溶解培养细胞,去除基因组DNA (gDNA)和保留RNA的完整性,套件包含逆转录(RT)互补脱氧核糖核酸合成试剂,要么probe-based (TaqMan探针)或dye-based (SYBR绿色染料)主混合实时PCR分析。
Cells-to-C的所有组件T包已经优化了一致的和可靠的性能。这有助于减少猜测参与装配不同的样品制备和实时rt - pcr掌握混合。
为了增加质量保证,Cells-to-CT互译TaqMan装备与TaqMan基因表达分析,验证和Cells-to-CT互译电力SYBR绿色装备与一组验证引物常见基因的目标。显示性能相当于与纯化获得RNA (图5)。
图5。灵敏度和检测使用Cells-to-C有限的目标序列T包。(A)的敏感性与溶菌产物与纯化RNA基因表达分析。海拉细胞(10 - 100000)加工使用Cells-to-C一式三份T互译TaqMan装备,或RNA是使用一个RNA旋转列方法纯化。每组样品分析了实时rt - PCR对7900年ht实时PCR体系,为韩国帝王和ACTB Cells-to-CT控制设备。(B)检测有限的目标序列。越来越多的NIH3T3细胞(鼠标)被添加到10000海拉细胞。这些细胞被加工使用TaqMan基因表达Cells-to-C一式三份T工具包(两步过程)或纯化试剂与RNA旋转列方法。所有样品都是反向转录mouse-specific (B2M)和人类基因(TKT)一式三份的反应在7900 ht快速实时PCR系统。
TaqMan基因表达Cells-to-C的性能T装备是比其他商用裂解工具包和纯化RNA。输入100 - 100000细胞/裂解反应进行。的敏感性TaqMan Cells-to-CT设备协议相当于得到纯化RNA,它超越了其他供应商(图6)。
CellsDirect qPCR工具包提供高度敏感的和具体的,实时qPCR结果直接从细胞,而不需要一个RNA净化一步测试时每反应至不到10000个细胞一个细胞。CellsDirect技术是专为最大灵敏度小样本(图1)。
图1所示。CellsDirect qPCR工具包提供敏感检测单个细胞。海拉细胞细胞溶解和resuspended CellsDirect协议。十倍系列稀释的细胞溶解产物是由10000个细胞一个细胞。RRKCA,低丰度的目标是发现使用TaqMan探针与CellsDirect互译qPCR与火箭在7700年ABI棱镜仪器装备。效率来衡量的标准曲线(图中未显示)R²= 0.998 97%。
CellsDirect互译qPCR包结合灵敏度和最高水平的便利和吞吐量。与CellsDirect互译包,把你的细胞溶解产物直接qPCR反应混合物,把它放在你的实时仪器,走了。这些包是理想的基因表达分析的样本收集使用LCM (图2)。
图2。CellsDirect互译qPCR工具包提供敏感模块样品的结果。CellsDirect RNA LCM显示样品的净化互译工具足够敏感的捕捉数据不到100个细胞。
跳过RNA净化完全与快速先进Cells-to-CTKits-going直接从培养细胞样本测量相对基因表达与实时rt - pcr (RT-qPCR)。以一种独特的方法溶解培养细胞,去除基因组DNA (gDNA)和保留RNA的完整性,套件包含逆转录(RT)互补脱氧核糖核酸合成试剂和TaqMan或SYBR绿色主混合实时PCR分析。
快速先进Cells-to-CT两步包是更快和更方便的使用比传统的RNA净化灵敏度的前提下(图3)。由于工作流lysate-based,没有失去与Cells-to-C RNAT板。在传统的RNA净化,少量的RNA总是输给了不完全洗脱的过滤器或磁珠。因此,能够在低输入细胞样品中检测出罕见的rna(10 - 1000)与Cells-to-C样品处理时高T包比较结果与样本使用RNA净化工作流(图4)。这一点,加上停止解决方案的好处,给Cells-to-CT工作流的敏感性比竞争对手包检测丰富和低成绩单副本。
图3。灵敏度的先进Cells-to-C TaqMan快T装备比其他包。104细胞细胞溶解后每个设备的协议。的最大溶解产物被添加到每个工具包的Cells-to-C RT (45%T和快速先进Cells-to-CT包;其他供应商)为10%。然后加入一定量25%的RT qPCR TaqMan数组的磷酸二酯酶的反应,使用每个工具的qPCR掌握混合。快速先进Cells-to-CT装备进行平均0.5摄氏度T比原Cells-to-CT装备和3.6摄氏度T比另一个供应商的工具包(11 x比其他供应商更敏感)。
图4。检测的比较。104HepG2细胞细胞溶解后每个设备的协议。的最大溶解产物被添加到每个工具包的Cells-to-C RT (45%T和快速先进Cells-to-CT包;其他供应商)为10%。25%加入一定量的RT qPCR反应为其他供应商的设备;30%是添加到先进Cells-to-C qPCR反应的快T装备,45%添加到权力SYBR工具包。化验10个不同的基因。大多数的基因没有发现在这个细胞系。的基因检测,快速先进Cells-to-CT装备有较低的CT值比其他工具对于大多数基因。
Cells-to-CT包提供一个完整的工作流实时RT-qPCR分析直接从培养细胞RNA净化。以一种独特的方法溶解培养细胞,去除基因组DNA (gDNA)和保留RNA的完整性,套件包含逆转录(RT)互补脱氧核糖核酸合成试剂,要么probe-based (TaqMan探针)或dye-based (SYBR绿色染料)主混合实时PCR分析。
Cells-to-C的所有组件T包已经优化了一致的和可靠的性能。这有助于减少猜测参与装配不同的样品制备和实时rt - pcr掌握混合。
为了增加质量保证,Cells-to-CT互译TaqMan装备与TaqMan基因表达分析,验证和Cells-to-CT互译电力SYBR绿色装备与一组验证引物常见基因的目标。显示性能相当于与纯化获得RNA (图5)。
图5。灵敏度和检测使用Cells-to-C有限的目标序列T包。(A)的敏感性与溶菌产物与纯化RNA基因表达分析。海拉细胞(10 - 100000)加工使用Cells-to-C一式三份T互译TaqMan装备,或RNA是使用一个RNA旋转列方法纯化。每组样品分析了实时rt - PCR对7900年ht实时PCR体系,为韩国帝王和ACTB Cells-to-CT控制设备。(B)检测有限的目标序列。越来越多的NIH3T3细胞(鼠标)被添加到10000海拉细胞。这些细胞被加工使用TaqMan基因表达Cells-to-C一式三份T工具包(两步过程)或纯化试剂与RNA旋转列方法。所有样品都是反向转录mouse-specific (B2M)和人类基因(TKT)一式三份的反应在7900 ht快速实时PCR系统。
TaqMan基因表达Cells-to-C的性能T装备是比其他商用裂解工具包和纯化RNA。输入100 - 100000细胞/裂解反应进行。的敏感性TaqMan Cells-to-CT设备协议相当于得到纯化RNA,它超越了其他供应商(图6)。
单细胞分析的关键应用,如候选药物筛选、细胞分化和干细胞研究,测量单个细胞对特定刺激的反应。因为组织组成的异构混合物的细胞,基因表达测量基于均质人口不占小但重要的改变发生在单个细胞。
这个工具提供了一个验证工作流用于基因表达分析和提供了一个标准化的单个细胞的研究平台。
人群中单细胞精度
我们已经开发出强大的试验设计算法,优化大师混合,直观的数据分析软件,和灵活的工具来帮助利用qPCR在丰富和多样化的应用程序。
学习如何准备从培养细胞RNA基因表达分析,而不需要RNA净化。快速通道RT-qPCR只有7分钟。
洗细胞与PBS和吸入Cells-to-C PBST协议。
添加溶菌作用与细胞,解决井上下移液混合,静置5分钟在Cells-to-C室温T协议。
停止解决方案添加到细胞裂解的解决方案,并等待两分钟在Cells-to-C室温T协议。
看准备的RT大师在Cells-to-C混合T协议。
这个演示展示了如何Cells-to-C ASCBT由qPCR工具包允许您测量相对基因表达而无需放大之前去除RNA。
学习如何准备从培养细胞RNA基因表达分析在七分钟。
你得到实时PCR结果与Cells-to-C用更少的时间T板。他们是快速,简单,健壮。更少的处理步骤确保协议时间短,提高一致性,最小的样品损失,降低污染风险。
Cells-to-CT包提供一个完整的工作流实时存在分析直接从培养细胞RNA净化。逆转录和qPCR是表现在一个好。包使用逆转录(RT)试剂与dye-based互补脱氧核糖核酸合成和可用(SYBR绿色染料)或probe-based (TaqMan探针)主混合实时PCR分析。
互译的互译和两步包不同包逆转录和实时PCR结合成一个单一的步骤,降低总体协议的时间。
基于下面的十个实验样本,Cells-to-CT装备生产6.6 g的塑料垃圾和0毫升:危险废物在七分钟相比,140克塑料垃圾和18毫升危险废物与标准RNA与RNeasy净化。
| RNeasy 35分钟 140克塑料垃圾 18毫升危险废物 |
 |
Cells-to-CT 7分钟 6.6 g塑料垃圾 0毫升危险废物 |
是的。C细胞T包是兼容多路qPCR化验。如果许多目标正在测试,我们建议使用TaqMan格式。
Cells-to-CT技术功能独特的溶解方法培养细胞,去除基因组DNA (gDNA)和保留RNA的完整性。因此,按照协议中的溶解/ DNase治疗步骤,gDNA污染将为qPCR不是一个问题。
是的,这将是足够的材料进行微阵列分析。前置放大器步骤后的样品的体积是26.5µL稀释530µL 1:20的总量,这比足够大量的TaqMan qPCR化验,TLDA卡片或使用QuantStudio开放数组。
虽然我们没有尝试这个内部,有理由相信这应该工作。然而,在RT协议的优化步骤可能需要,作为FFPE样品有很多RNA交联从而影响RT酶的效率。加热10分钟的样品在80°C添加RT为了得到好的互补转换应该提高逆转录。
| 细胞系 | 经济增长类型 | 源物种 | 组织来源 |
|---|---|---|---|
| A549 | 附着 | 智人 | 肺癌 |
| BJ | 附着 | 智人 | 包皮 |
| CHO-K1 | 附着 | c将(仓鼠) | 卵巢 |
| COS-7 | 附着 | c . aethiops(猴子) | 肾脏 |
| du - 145 | 附着 | 智人 | 前列腺癌 |
| hek - 293 | 附着 | 智人 | 肾脏 |
| 海拉 | 附着 | 智人 | 宫颈腺癌 |
| HepG2 | 附着 | 智人 | 肝细胞癌 |
| Huh-7 | 附着 | 智人 | 肝 |
| Jurkat | 悬架 | 智人 | 急性淋巴细胞白血病 |
| K562 | 悬架 | 智人 | 骨髓 |
| 我- 180 | 附着 | 智人 | 宫颈表皮样癌 |
| NCI-H460 | 附着 | 智人 | 肺 |
| 2神经 | 附着 | m .骶 | 大脑 |
| NIH / 3 t3 | 附着 | m .骶(老鼠) | 胚胎成纤维细胞 |
| PC-12 | 附着 | r形(老鼠) | 肾上腺嗜铬细胞瘤 |
| PT-K75 | 附着 | 美国scrofa(猪) | 鼻鼻甲粘膜 |
| Raji | 悬架 | 智人 | B淋巴细胞 |
| SK-N-AS | 附着 | 智人 | 大脑成神经细胞 |
| SK-N-SH | 附着 | 智人 | 大脑纤维母细胞 |
| u - 2操作系统 | 附着 | 智人 | 骨 |
| u - 87毫克 | 附着 | 智人 | 脑胶质母细胞瘤 |
请注意:由于不同细胞的大小和构成,细胞每裂解反应的最大数量为不同的细胞系可能略有不同。抑制试验和最小样本输入使用TaqMan Cells-to-CT控制设备。
核酸纯化和分析支持中心
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仅供研究使用。不用于诊断程序。
