概述

二次抗体关键部件的检测系统;选择一个最佳的二次抗体可以提高积极的信号除了减少假阳性或阴性染色。

重组单克隆抗体
——大的解决方案在多路复用

重组单克隆抗体针对三个主要鼠标同形像,IgG1, IgG2a, IgG2b替代cross-adsorbed二级抗体。他们有能力检测个人同形像没有任何物种或同形像大,使多个标记小鼠单克隆抗体同时使用。多路复用没有物种问题因此直接和另一个物种不需要采购。

点击在这里了解更多关于多路复用使用二次抗体。

阅读我们的概述多路复用荧光蛋白免疫印迹发现如何对你有益。

同形像统计图具体的二级抗体视频

几乎看我们的新视频,演示了如何使用Bio-Rad老鼠免疫球蛋白同形像具体的二级抗体可以交付结果你可以相信在成像多路复用,没有误报的风险,在只有两个简单的步骤。

同形像的好处具体的二级抗体:

  1. 的优势重组单克隆二级在多克隆抗体:
  • 多克隆同形像损耗产生的特定的抗血清的反应不受欢迎的目标并不是100%有效。而选择重组人类单克隆抗体对抗原表位的同形像
  • 多克隆抗体可以显示批次之间的差异;重组单克隆抗体
  1. 高特异性:信号检测到每一次要是特定于每个主要。
  2. 最小非特异性背景:同形像具体的二级抗体不与非目标免疫球蛋白结合。
  3. 适合多路复用:没有绑定在多路非目标主要抗体实验。
  4. 易于使用:直接代替任何二级,不需要特殊的协议或额外的步骤
  5. 多用途:可用于包含IHC,如果,流式细胞术和免疫印迹。

多路复用的好处与同形像具体的二级抗体了成像

多路复用的好处与同形像具体的二级抗体了成像

同形像统计图具体的二级抗体在不同的应用程序:

西方墨点法

免疫印迹实验,检测多个目标可以通过使用同形像具体的二级抗体,作为主要直接标记抗体可能不够明亮。

免疫印迹下图显示目标的具体检测抗体的三车道4中同形像特定的抗体,相比6和8巷2显示所有三个抗体的存在:

  • IgG1同形像检测
    • 人类Anti-Mouse DyLight 488 (HCA309D488),克隆AbD24121承认IgG1同形像的鼠标Anti-Actinβ(VMA00048),42 kDA分子量,见巷4。AbD24121不承认鼠标Anti-PCNA IgG2a或鼠标Anti-Ezrin IgG2b
  • IgG2a同形像检测
    • 人类Anti-Mouse DyLight 650 (HCA310D650),克隆AbD24124承认IgG2a同形像的鼠标Anti-PCNA (VMA00018),29日kDA分子量见巷6。AbD24124不承认鼠标Anti-ActinβIgG1或鼠标Anti-Ezrin IgG2b
  • IgG2b同形像检测
    • 人类Anti-Mouse DyLight 550 (HCA309D488),克隆AbD24127承认IgG2b同形像的鼠标Anti-Ezrin (VMA00344),80 kDA分子量见巷8。AbD24127不承认鼠标Anti-ActinβIgG1或鼠标Anti-PCNA IgG2a
使用同形像具体的二级抗体荧光蛋白免疫印迹。

使用同形像具体的二级抗体荧光蛋白免疫印迹。

海拉溶解产物(25µg)通道2,4,6,8。检测进行了如下:

鼠标IgG1 Anti-Actinβ(VMA00048)在0.5µg /毫升用于车道2和4,其次是IgG1特定人类Anti-Mouse Dylight 488 (HCA309D488)0.3µg /毫升(绿色)。

鼠标IgG2a Anti-PCNA (VMA00018)0.5µg /毫升在2和6车道,其次是IgG2a特定人类Anti-Mouse Dylight 650 (HCA310D650)0.3µg /毫升(蓝色)。

鼠标IgG2b Anti-Ezrin (VMA00344)使用0.5µg /毫升在车道2和8中,紧随其后的是IgG2b特定人类Anti-Mouse Dylight 550 (HCA311D550)0.3µg /毫升(红色)。

可视化ChemiDocMP成像系统。

成像——包含IHC如果

同形像的三个具体的二级抗体是设计用于多路成像:

  • 非常具体:检测同一物种和单克隆抗体检测三种不同抗原/抗体没有大
  • 多功能:进一步增加你的多路复用功能结合同形像特定和物种特定二级抗体。删除后续抗体识别的需要使用不同的物种

在五个图片你可以看到所有三个同形像的高度特定的荧光染色法具体的二级抗体。

荧光染色法人类结肠癌的使用同形像特定二级抗体。

荧光染色法人类结肠癌的使用同形像特定二级抗体。

FFPE人类胰腺沾鼠标Anti-Cytokeratin 19和Anti-Mouse IgG1 (HCA309D488)(绿色)和鼠标Anti-PGP9.5 (7863 - 2004)和人类Anti-Mouse IgG2a (HCA310D550)(红色)。

显色染色的人类结肠使用同形像特定二级抗体。

显色染色的人类结肠使用同形像特定二级抗体。

FFPE人类胰腺沾鼠标Anti-Cytokeratin 19和Anti-Mouse IgG1 (HCA309P)(棕色)和鼠标Anti-PGP9.5 (7863 - 2004)和人类Anti-Mouse IgG2a(红色)。

荧光染色法人类结肠癌的使用同形像特定二级抗体。

荧光染色法人类扁桃体的使用同形像特定二级抗体。

FFPE人类扁桃体沾鼠标Anti-Macrophages /组织细胞(MCA1478)和人类Anti-Mouse IgG2b(红色)和鼠标Anti-PCNA (MCA1558)和人类Anti-Mouse IgG2a (HCA310D650)(绿色)。

流式细胞术

使用二次抗体流式细胞术不推荐;最好直接用共轭多路复用时抗体。然而这是不可能的,如果:

  • 一个共轭是不可用的
  • 或者,如果不能结合抗体,因为:
    • 不纯的或只是部分纯如浮在表面的组织文化
    • 它包含载体蛋白
    • 太稀
    • 在数量不足

间接染色法包括谨慎的优化实验,以避免非特异性结合。为了帮助实现这一目的,Bio-Rad已经创建了一个指南指南所以你可以达到最好的特定使用二次流染色检测试剂。

下面的图像显示二级抗体的特异性表面,细胞内染色。

表面染色使用荧光共轭二次抗体。

表面染色使用荧光共轭二次抗体。

鼠标反CD3分子(MCA463)标记与人类Anti-Mouse DyLight 488 (HCA309D488)特定的主IgG1鼠标和鼠标反CD20 (MCA1710)贴上HuCAL®Anti-Mouse DyLight 650 (HCA311D650)主IgG2b特定的鼠标。

所有实验进行红细胞溶解人体血液的人类血清淋巴细胞的10%。数据获得ZE5细胞分析仪。

使用荧光共轭二次抗体的细胞内染色。

使用荧光共轭二次抗体的细胞内染色。

鼠标反干扰素γ(MCA1581)标记与人类Anti-Mouse DyLight 488 (HCA309D488)特定的主IgG1鼠标和鼠标反CD3 (MCA2184与人类Anti-Mouse PE)标记特定的鼠标主要IgG2a。

所有实验进行红细胞溶解人体血液,固定和permeabilized Leucoperm (BUF09),封闭的人类血清淋巴细胞的10%。数据获得ZE5细胞分析仪。

ELISA

同形像具体的二级抗体是理想的用于ELISA如下图所示。

ELISA检测IgG1 22只使用同形像具体的二级抗体

ELISA检测IgG1使用同形像统计图的具体二次抗体。

鼠标IgG1、IgG2a IgG2b和BSA的ELISA板上涂复制行当时探测与人类Anti-Mouse IgG1美联社,克隆AbD24121 (HCA309A)一倍连续稀释。HCA309A只能识别鼠标IgG1,不是IgG2a或IgG2b。

同形像统计图具体的二级抗体范围

人类Anti-Mouse IgG1

人类Anti-Mouse IgG2a

人类Anti-Mouse IgG2b
格式 产品目录号 格式 产品目录号 格式 产品目录号
DyLight 488 HCA309D488 DyLight 650 HCA310D650 合 HCA311P
DyLight 650 HCA309D650 合 HCA310P Dylight 650 HCA311D650
体育 HCA309PE DyLight 550 HCA310D550
合 HCA309P
碱性磷酸酶 HCA309A

二次抗体的应用

协议和资源

优化你的二次抗体检测系统

Baidu