结构生物学研究
低温电子显微镜使结构分析挑战生物的目标,如大的复合体,灵活的物种和膜蛋白。
微是一个激动人心的新技术,它允许快速、高分辨率结构测定小分子和蛋白质。原子的细节可以从单个纳米晶体(< 200 nm大小),即使在一个异构混合物。微数据获得在cryo-transmission电子显微镜(cryo-TEM),使用电子入射电子束。
由于微衍射技术,样品需要结晶,结晶过程为x射线晶体学是一样的。然而,小得多的晶体可用于微因为水晶与电子的相互作用强于以x射线。晶体中只有100 nm大小可以很容易地进行分析。这可能大大缩短样品制备过程,允许分析太小的晶体衍射与其他方法。数据收集完成后仅几分钟,和3 d结构可以确定在原子分辨率。
微的独特要求把它分开,不仅从其他低温电子显微镜(低温电子显微镜)技术,但是从传统晶体学。微需要小晶体(< 50µm),但样本可以从更大的削减(或研磨)晶体使用聚焦离子束(FIB),如果必要的。(注意,晶体> 200海里二级散射增加,混淆数据。)
样品制备小分子和蛋白质样品之间也各不相同。小分子晶体通常干燥,经常可以在室温下进行分析。机械研磨可以很容易地用来减少大晶体的大小,或分子可以简单地使用蒸发结晶自发的解决方案。
然而,蛋白质晶体通常保存在水留住水分,自然状态。这些样品是随后瞬间冷冻(陶瓷)为了避免样品损坏由于结晶成冰作用。陶瓷样品湿度变化很敏感或缓冲,在轻触可能瓦解。因此,cryo-FIB铣是用来减少大型蛋白质晶体的大小。
微观结构生物学填补了缺口,因为x射线晶体学要求大的晶体,很难获得而同步x射线自由电子激光(XFELs)需要数以百计,如果不是数以千计,小的晶体结构分析的一个蛋白质和小分子。时间同步加速器也昂贵和访问是有限的。微独特提供快速、高分辨率分析,只需要一些小的晶体。
从纳米晶体在几分钟内获得衍射数据。
小至100纳米的纳米晶体可以很容易的进行分析,消除大型晶体生长的负担(如x射线晶体学中需要)。这也减少了所需的样本材料。可以分析不同的多晶型物和化合物的混合物。
获取硬件、软件和支持从一个单一的供应商。获得的数据可以使用x射线晶体学建立重建包处理。
微和单粒子分析可以执行相同的低温电子显微镜。这个解决方案兼容新显微镜,但也可以改造现有低温电子显微镜仪器上。
在药物发现微正变得越来越受欢迎,因为它可以用来确定protein-drug复合物的结构和小分子。至关重要的是,微减轻需要漫长而复杂的大水晶生长,显著效益快节奏的制药工业。
强调一些关键微的好处,我们决定对乙酰氨基酚的结构从商业样品。只有~ 10-12年克的样品被要求获得结构显示;纳米晶体也从填料和其他化合物组分组成的混合物。整个70度范围内的数据收集在几分钟内。
执行数据处理的开源衍射集成先进的光源(表盘)软件,如下面。重要的是要注意,虽然完整的结构可以从一个数据集,确定只有43%完成,额外的数据从其他晶体可以用于进一步加强这些结果。
的微完整解决方案,热科学cryo-TEM变成你自己的内部梁线结构的决心!
单粒子分析和微观功能在一个乐器 | |
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