Western Blotting入门

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Western blotting是一种强大的技术，可以让你积极地检测蛋白质，估计数量，并确定它们的分子量。所有这些都是从细胞或组织中提取的蛋白质混合物。

整个western blotting工作流由几个单独的步骤组成，每个步骤对于生成高质量的数据都是至关重要的。

本学习中心提供了深入的理论和实践的每个步骤的西方印迹过程，从样品准备到分析的最终印迹

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  样品制备

  含有所需蛋白质的细胞必须完全裂解，以确保高产量，同时去除细胞中的非蛋白质成分。良好的样品制备技术确保蛋白质在下游分析时不受损害。

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  电泳

  电泳分离样品中的蛋白质，并在后续检测中提供被检测蛋白质的分子量数据。

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  转移

  分离的蛋白质从凝胶转移到膜上，在那里它们被固定。高效的蛋白质转移需要最大的western blot敏感性。

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  检测

  一部好的干净的西部片取决于你抗体的特异性和敏感性。除了检测特定的蛋白质，样品中的总蛋白质也可以用总蛋白染色或新的技术来可视化，这些技术消除了染色和脱色的需要。

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  图像采集

  western blot的准确成像对于捕获blot数据进行下游分析至关重要。了解基本的成像概念，如灵敏度、分辨率和背景噪声来源，可以帮助您最大限度地提高图像数据质量。

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  图像分析与定量“，

  印迹图像含有丰富的信息。一些实验只需要一个定性的答案，但适当设计和执行的western blot实验也可以提供样品间相对蛋白表达的定量数据。