反IgE
反IgE
介绍
杰克逊ImmunoResearch鼠单克隆反IgE抗体是最新的除了我们的套件产品适合诊断研究和开发。特定的人类IgE抗体,他们补充我们现有的反人类免疫球蛋白,IgM, IgA抗体。反IgE可用共轭,选择范围的记者分子,包括碱性磷酸酶和生物素使优秀的敏感性。
关于杰克逊ImmunoResearch反IgE的
杰克逊ImmunoResearch反IgE mouse-derived单克隆抗体的反应,人类E类免疫球蛋白和ε(ε)链具体。
杰克逊ImmunoResearch鼠标反IgE(克隆ME.114数量)(209-002-241)是一系列记者可用共轭分子,适用于检测人类IgE通过各种技术,包括ELISA(酶联免疫吸附试验),侧流免疫测定(LFIA)、流式细胞术、免疫印迹,CLIA(化学发光免疫分析法)。
特异性
杰克逊ImmunoResearch反IgEε(ε)链具体被ELISA检测和显示最小大人类免疫球蛋白,IgM或IgA。图1是一个演示了杰克逊的特异性的免疫印迹ImmunoResearch反IgE显示没有其他免疫球蛋白类别的检测。我们没有测试过,如果这个抗体检测免疫球蛋白与其他物种。
图1:的特异性免疫印迹显示杰克逊ImmunoResearch反人类IgE IgE抗体。1μg净化人类免疫球蛋白(免疫球蛋白、免疫球蛋白、IgA或者IgM表示)被加载到单个井。非还条件下进行sds - page和蛋白质在硝化纤维膜涂抹。印迹被封锁5% BSA在PBS / T和探测与过氧化物酶反IgE (209-032-241在1:10K稀释)。使用ECL污点是可视化。
图2:免疫印迹检测显示100 ng净化人类IgE反IgE的减少和非还条件。请注意,这个抗体将弱信号检测时减少蛋白质,因此不建议应用检测减少IgE是必需的。
灵敏度
杰克逊ImmunoResearch反IgE可用来检测人类IgE从各种来源的敏感性。图3展示了杰克逊的敏感性ImmunoResearch反IgE当用于间接ELISA,显示其检测能力IgE涂层井在两个不同的浓度。图4演示了杰克逊的敏感性ImmunoResearch反IgE使用时以间接ELISA检测IgE纯化不同骨髓瘤和等离子体源。
在不同的涂料检测纯化IgE浓度
图3:IgE的间接ELISA检测。板涂上100μl /纯化IgE从人血浆在碳酸盐岩层2或0.2μg /毫升缓冲一夜之间在4oc . 300的板被μl / 1% BSA (IgG-Free, Protease-Free牛血清白蛋白001-000-161在PBS / T) 2小时。主要的抗体,反IgE (209-002-241在PBS / T)连续稀释1:3在板和孵化在室温下2小时。二次抗体,过氧化物酶AffiniPure山羊Anti-Mouse免疫球蛋白,Fcγ特定片段(最小值X, Bov小时Sr Prot) (115-035-071在PBS / T),稀释1:20,000孵化的板1.5人力资源。三甲应用和阅读30分钟后在620海里。
检测的IgE等离子体和骨髓瘤
图4:检测人类来自不同来源的IgE的间接ELISA。板涂上100μl /净化人类IgE指定来源2μg /毫升碳酸盐岩层缓冲一夜之间在4oc . 300μl /良好的板被1%牛血清白蛋白(BSA) (001-000-161在PBS / T)在室温下2小时。主要的抗体,反IgE (209-002-241在PBS / T)连续稀释1:3板和在室温下培养1小时。二次抗体,过氧化物酶AffiniPure山羊Anti-Mouse免疫球蛋白,Fcγ特定片段(最小值X, Bov小时Sr Prot) (115-035-071),稀释1:20,000孵化的板1.5人力资源。三甲应用和阅读30分钟后在620海里。
检测的IgE等离子体
杰克逊ImmunoResearch反IgE提供优秀的敏感性,当用于夹心ELISA抗体捕捉伙伴。我们建议使用两个不同的单克隆抗体捕获和检测。在这种格式中,用一个非结合的反IgE抗体作为涂层之前阻止与牛血清白蛋白(IgG-Free Protease-Free001-000-161)。洗后,孵化与稀释样品。检测步骤中,使用一种共轭反IgE抗体,如碱性磷酸酶反IgE (209-052-241)或过氧化物酶反IgE (209-032-241),其次是适当的衬底或可视化技术。图5举例说明了应用程序的直接三明治的量化分析来验证总IgE使用非结合的反IgE从患者样本与一个碱性磷酸酶共轭检测抗体。总IgE(桥/ l)的患者样本中使用这个实验以前的罗氏Cobas总IgE化验。这些结果显示在图5的轴。
总IgE患者样本
图5:从人类血清和血浆样本中检测总IgE的直接三明治ELISA。板是涂有非结合的反IgE抗体(克隆10 a10)在100μl / 2μg /涂层缓冲一夜之间在4毫升oc . 300μl /良好的板被1% BSA (001-000-161在磷酸缓冲盐),0.05%渐变®(PBS / T)为1.5小时。孵化与100μl /血浆/血清样本稀释接触PBS / T 1小时。检测抗体,杰克逊ImmunoResearch碱性磷酸酶反IgE (209-055-241),是稀释在PBS / T和孵化1:10,000 100μl / 1小时。100μl / DEA的刚做好的衬底被孵化的板30分钟在405 nm和阅读。
建议稀释因素
稀释因素建议在下表中给出了范围,因为许多因素的最佳稀释是一个函数,如抗原密度、渗透率等。最优工作稀释应确定为每个应用程序经验。
显示稀释表
| 应用程序 |
| 共轭 |
ELISA |
西方的屁股* |
流式细胞术 |
| 非结合的 |
10 - 20µg /毫升 |
| FITC |
1:50-1:200 |
| R-PE |
|
|
1:50-1:200 |
| 辣根过氧化物酶 |
1:5,000-1:100,000 |
1:5,000-1:100,000 (non-ECL)
1:10,000-1:200,000 (ECL) |
|
| 碱性磷酸酶 |
1:5,000-1:50,000 |
1:5,000-1:50,000 |
|
| Biotin-SP(使用Fluorophore-Conjugated链霉亲和素) |
|
|
1:200-1:1,000 |
| Biotin-SP(使用enzyme-Conjugated链霉亲和素) |
1:20,000-1:400,000 |
1:20,000-1:400,000 |
|
*请注意,这种抗体将弱信号检测时减少蛋白质,因此不建议应用检测减少了免疫印迹的IgE是必需的。
引用
- 考克斯L。Larenas-Linnemann D。在业,r . Passalacqua, G。,2010年。说同一种语言:世界过敏组织皮下免疫治疗系统性反应评分系统。变态反应与临床免疫学杂志,125(3),载《- 574. e7。
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