避免常见缺陷的定量免疫印迹实验

新方法的文章提供了一个严格的和简洁的工作流与具体说明如何生成和使用免疫印迹实验分析定量数据。合著的论文Bio-Rad科学家发表在《生物医学研究国际,也强调了最近推出了技术提高再现性。结果是一个强大的、循序渐进的指导获得定量和可再生的光密度数据来自西方的屁股不管具体的实验。

技术是具有挑战性的,需要遵循严格的方法来实现可再生的和定量的数据。根据一项最近的调查超过750实验室,41%的研究人员说他们的西方墨迹失败四分之一的时间。

奥尔德林戈麦斯博士,加州大学的助理教授,戴维斯认为有缺陷的西方的屁股并不少见。比较不同样本利益表达的蛋白质,蛋白质丰度普遍规范化看家基因。“当我看到一个大型的、密集的乐队感兴趣的蛋白质或管家蛋白,我畏缩,”戈麦斯说。密集的乐队通常意味着感兴趣的蛋白质或管家蛋白不再是在分析的线性动态范围。没有准确的定量数据可以从这样的污点。

定量西方的屁股的另一个常见原因失败是有缺陷的或不完整的协议,根据论文的第一作者肖恩·泰勒和Bio-Rad现场应用科学家(看视频他的讨论在这里)。为了解决这个问题,泰勒的审查抓好实验设计和样品制备和讨论适当的蛋白质加载的线性动态范围的定义,所有关键因素生成有意义的定量免疫印迹数据。

泰勒还引入了更高级的概念来提高再现性,简化工作流程,减少免疫印迹的时间和成本。其中一个方法是没有污点的总蛋白质标准化,在过去的一年里有吗证明优于使用管家蛋白或全部蛋白质染色正确加载错误。

通过本文,泰勒希望研究人员现在有一个简单的指南,以确保定量和可再生的免疫印迹数据依赖这种技术的研究领域。