使用新的Xeno-Free改善低温贮藏的人类肝细胞冷冻保护剂的解决方案

目的:
优化xeno-free低温贮藏协议主要人类肝细胞。

方法:
对低温贮藏肝细胞的需求增加的临床和研究目的。尽管一些肝细胞冷冻保存协议可用,急需改善。我们首先比较控制利率冻结聚苯乙烯盒冰冻和组之间并没有发现任何明显的变化。使用聚苯乙烯盒冻结,我们比较两个xeno-free冻结冻结的解决方案主要人类肝细胞:新媒体(STEM-CELLBANKER, CB),其中包含二甲亚砜(DMSO)和无水葡萄糖,渗透和非渗透性冷冻保护剂,常用DMSO -威斯康辛大学(DMSO-UW)媒介。肝细胞的生存能力评估的台盼蓝排斥法以及基于calcein-esterase live-dead前后测定低温贮藏。肝细胞的功能被评估评估低温贮藏前后酶活性的主要细胞色素P450亚型(cyp): CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和CYP3A7。

结果:
新的冷冻保护剂组合保护肝细胞生存能力明显优于标准DMSO-UW协议(P < 0.01)。之间没有显著差异在可行性评估台盼蓝(TB)和Live-Dead测定方法。有相关性的可行性新鲜肝细胞和细胞生存能力之间的差异CB和DMSO协议(r(2) = 0.69)使用结核病的方法。然而,由于高类内变化主要cyp的活动,杜绝任何统计上的差异。低温贮藏的人类肝细胞使用冷冻保护剂组合是一个简单和xeno-free程序带来更好的肝细胞生存能力。因此,它可能是一个更好的选择标准DMSO-UW协议。估计CYP活动似乎没有相关方法比较不同群体由于高正常肝细胞功能之间的可变性不同肝脏样本。

这篇文章发表在《世界肝脏病学杂志是免费访问。