小说的凝胶电泳技术快速大规模Spec-Based生物标志物的诊断

质谱(MS)是一种强大的生物标志物分析方法因为它使高度敏感和准确的测量目标分子在临床样本。女士在临床诊断中的应用,如新生儿代谢筛查,进步了关注代谢物标记。女士测量蛋白质目前主要用于小说标记发现研究,但越来越多的兴趣在临床标记诊断中的应用作为替代分析。

MS-based量化的蛋白质生物标记物主要由一个自底向上的方法使用获得的肽片段酶蛋白与胰蛋白酶消化。标准消化协议需要反应时间超过20小时,这是一个样品制备工作流的病原因素。

虽然蛋白质女士量化的高度敏感,血浆和血清蛋白质组是高度复杂的,和干扰其他组件构成了重大挑战。高精度检测目标标记,方法主要用于工厂化养殖血清蛋白组件(如白蛋白或选择性富集目标使用抗体标记列已报告,但脱靶效应定量结果和处理多个样本的困难仍障碍。

在这项研究中,我们关注可溶解的聚丙烯酰胺凝胶使用N, N ' bis(丙烯酰)乌洛托品(BAC)作为交联来解决这些问题。BAC交联聚丙烯酰胺凝胶容易溶解,减少治疗,使蛋白质的复苏已经逃到解决方案。我们发现适合快速恢复蛋白质胰蛋白酶消化在高温条件下,我们成功地建立一个高通量样品制备方法MS-based生物指标量化,我们叫BAC-DROP (BAC-Gel溶解消化PAGE-Resolved目标蛋白质)。

高分辨率的蛋白质分离与BAC-DROP女士特别有效的量化目标跟踪标记蛋白质来自临床样本。通过引入BAC-DROP MS-based量化工作流的炎性生物标志物c反应蛋白(CRP),我们能够成功完成只有5个小时的样品预处理和量化CRP从0.5μL人类血清样本。我们也成功的血清学诊断乙型肝炎病毒(HBV)感染HBsAg量化结合BAC-DROP和女士最近,病毒感染的诊断女士的兴趣一直在快速增加,以COVID-19的诊断。的高通量样品制备方法,BAC-DROP所示本研究将不仅适用于乙肝病毒也给其他病毒性传染病样本。

参考
Takemori et al。BAC-DROP:快速消化的蛋白质组分离通过可溶解的聚丙烯酰胺凝胶电泳和自下而上的蛋白质组学工作流应用程序。j .蛋白质组研究》2020年12月24日。https://doi.org/10.1021 / acs.jproteome.0c00749

本文从以下转载材料。注:材料可能是长度和内容的编辑。为进一步的信息,请联系引用源。