定量蛋白质组学揭示只有一个内质网的子集有助于吞噬体

摘要

吞噬体通过杀死和降解病原体进行抗原呈递，是涉及先天免疫和适应性免疫关键方面的细胞器。虽然已经确定吞噬体由质膜(PM)、核内体和溶酶体(endo/lyso)组成，但内质网(ER)膜可能在吞噬体的形成中发挥重要作用的概念仍有争议。然而，一种准确估计潜在源细胞器和污染物对吞噬体蛋白质组的贡献的方法一直缺乏。在本文中，我们开发了一种蛋白质组学方法，通过比较J774A中各种细胞器与它们的总膜和核后上清的来源，客观地量化各种细胞器对早期和晚期吞噬体的贡献。1小鼠巨噬细胞系。使用定量无标签质谱法，估计了与数百种蛋白质对应的多肽的丰度，并将其归因于5种细胞器之一(例如PM, endo/lyso, ER，高尔基体和线粒体)。该数据结合用于检测潜在污染源的SILAC方法，揭示了ER是吞噬体膜的一部分，并贡献了早期吞噬体蛋白质组的约20%。此外，只有一个ER蛋白子集被招募到吞噬体，这表明ER的一个特定的子结构域可能参与吞噬作用。Western Blotting和免疫荧光验证了这一结论;我们能够证明ER标记GFP-KDEL积累的ER部分被排除在吞噬体中，而包含衍生SNARE蛋白mVenus-Stx18的ER部分被招募。这些结果强调了描述利什曼原虫、布鲁氏菌和军团菌所使用的致病机制的有希望的新途径，这些细菌在富含er的吞噬体中茁壮成长。

本文在线发表于Molecular and Cellular Proteomics，可免费获取。