研究发现商用抗体是没有约束力的目标
抗体的问题
特别结合抗原的抗体的能力被利用在一个数组的科学领域多年来,无论是在实验室和诊所。这个特定的绑定允许科学家利用抗体作为“探针”,可以在样品中与蛋白质结合,准确地识别这些蛋白质在细胞和数量。
作为蛋白质生产可能出错是基因突变的结果,这个工具帮助我们理解人类疾病起到了至关重要的作用和诊断工具的发展。因此,大量的公司集中精力制造抗体作为商业产品可以卖到科学研究和在临床中使用。
一个关键问题,强调的是一些商用抗体不专门结合蛋白质生产检测。这有助于科学面临的“再现性危机”,并研究曾采用这种抗体必须质疑。
我们怎样才能更好的验证抗体吗?
毫无疑问,更好的方法是抗体所需的验证,以确保全球实验室可以利用这个宝贵的工具在他们的工作。
领导的一个团队彼得·麦克弗森在的神经(蒙特利尔神经学研究所和医院)认为,他们可能已经找到一个解决方案。
在一项新的研究发表在e生活麦克弗森和他的同事们决定使用人类蛋白质编码的基因C9ORF72作为探索抗体的测试用例验证问题和突出过程其他实验室可以采用来验证自己的抗体。
C9O4F72是基因突变的主要原因是条件肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和额颞叶痴呆。商用抗体用于随后的目标蛋白质的高被引论文,因此评估这些抗体的特异性是关键。
在出版,作者概述他们的测试方法抗体效度:
“人类细胞系表达高的目标,通过蛋白质组学数据库,修改CRISPR / Cas9淘汰赛(KO)相应的基因。商业目标购买抗体和免疫印迹检测比较父母和KO。验证抗体用于明确识别最高度表达细胞系,如果需要,生成新的科斯和线是通过免疫沉淀反应和免疫荧光的筛选。选择抗体免疫组织化学等用于更密集的过程,“表明这个管道是“容易实现和可伸缩的”。
“我们欠资助者和病人做的更好”
研究小组测试共有16个抗体广告公司作为C9ORF72具体。用免疫荧光抗体的方法用于染色蛋白质,这样他们在显微镜下可见,研究小组发现,只有16个抗体准确检测C9ORF72之一。关注的是抗体通过验证标准尚未采用科学研究、验证失败,但是那些。
因此,研究结果质疑先前的工作,采用了这些抗体检测C9ORF72和强调迫切需要更好的抗体验证协议。
“当我们从事C9ORF72纸,它变得不那么一个基因和更多关于一个模板其他实验室可以使用验证抗体,”麦克弗森说。“我们使用的程序不是革命性的,事实上,这使得我们的方法广泛适用于任何实验室技术在艺术,但据我所知,这是第一个文件来描述抗体的流程,验证。再现性危机的很大一部分是因为糟糕的抗体验证。我们欠资助者和病人做得更好。”
参考:Laflamme et al . 2019。抗体鉴定程序和应用程序的实现主要ALS / FTD C9ORF72疾病基因。eLife。DOI: 10.7554 / eLife.48363。
