一种实时监测程序性细胞死亡的Annexin V方法

我们开发了一种均相发光膜联蛋白V结合检测方法，使用多模式平板阅读器实时检测细胞凋亡的发生。该检测试剂具有两种不同的膜联蛋白V融合蛋白，被设计成包含二元荧光素酶、荧光素酶底物和用于检测坏死细胞的细胞不渗透荧光DNA染料的互补结构域。annexin-荧光素酶片段融合对彼此只有适度的亲和力，因此在活细胞存在时发光仍然很低。当融合蛋白中的膜联蛋白V与暴露在凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸紧密结合时，荧光素酶片段重组形成活性酶并产生发光。该试剂直接添加到培养的细胞中，提供了一种均匀的方案，不需要用于流式细胞术的荧光膜联蛋白V结合试验通常需要的细胞清洗步骤。通过重复记录来自相同细胞样本的发光和荧光，实时方法已用于监测几个模型系统中的凋亡和继发性坏死动力学。