Cas9由最优启动子改善基因在真核细胞行编辑合成crRNA和tracrRNA搭配

哺乳动物细胞的基因组工程的兴趣一直在增加在过去的几年中发展的新工具来创建在特定地点在细胞基因组DNA断裂。定期在这些工具中,CRISPR(集群空间短回文重复)-Cas9 (CRISPR相关蛋白9)系统已获得重大利益由于它的相对简单性和易用性相比其他基因组工程技术。Cas9 CRISPR-Cas9系统需要一个复杂的蛋白质与trans-activating RNA (tracrRNA)和基因打靶CRISPR RNA (crRNA)(图1),或一个指导RNA (sgRNA,一种嵌合tracrRNA crRNA)。

这里给出的结果在使用合成效率crRNA和tracrRNA引入基因编辑事件与质粒表达Cas9 co-transfected时。我们探索使用抗生素和fluorescence-activated细胞排序(流式细胞仪)方法进行浓缩的细胞发生了基因编辑,和多个启动子的使用提高效率的基因编辑Cas9和合成tracrRNA crRNAs。