利用化学合成RNA CRISPR-Cas9基因组编辑

CRISPR-Cas9系统允许研究人员快速编辑功能的蛋白质的基因敲除在哺乳动物,鱼类和植物基因组,等等,因此极大地改变了生物研究。CRISPR-Cas9系统需要外源性Cas9核酸酶传递到细胞,可以通过表达质粒的转染,信使核糖核酸或蛋白质,或通过与慢病毒转导粒子。除了Cas9核酸酶,自然CRISPR-Cas9系统还需要两个RNA组件:CRISPR RNA (crRNA)由spacer-derived repeat-derived序列的序列和tracrRNA,这与通过repeat-derived crRNA序列。crRNA: tracrRNA复杂新兵Cas9核酸酶和DNA裂解上游protospacer-adjacent主题(PAM)。crRNA和tracrRNA可以用一个循环序列连接在一起的一代嵌合单导RNA (sgRNA)。基于矢量的方法,克隆和序列验证每个sgRNA向量可以费力而耗时,特别是如果目标是学习目标或成千上万的基因。同样,体外转录的sgRNA还需要额外的时间和质量控制,以确保一致性的长度和转录产物的纯度。相比之下,可以很容易地用于化学合成快速生成crRNA和tracrRNA分子分别或综合sgRNA直接交付到细胞基因编辑。