使用BioCube™系统和微板细胞仪进行高通量自动化高含量筛选
摘要
许多高含量分析(HCA)平台由于其低通量、大数据文件和与高密度微板不兼容而提供的初级筛选能力有限，使得部署这种系统进行高通量筛选不切实际。激光扫描微孔板细胞仪，如Acumen Explorer，提供快速的读取和分析时间(通常<10分钟)。此外，96、384和1536孔微孔板可以在等效板读取时间进行分析，因为扫描是在一个区域而不是在井的基础上进行的。例如，在测量蛋白激酶活化(一种常见的高含量测定)时，该方案的多步骤性质是复杂的，需要大量协调劳动来执行。在这里，我们模拟了Protedyne BioCube系统和Acumen Explorer的集成，用于实际的高通量、高含量的蛋白激酶筛选。集成细胞培养，化合物添加，免疫检测和分析的能力可达40,000孔/天，具有优越的过程控制。
介绍
扩大用于目标识别和初级筛选活动验证的基于细胞的分析并不是一项简单的工作。关键因素包括大量细胞的培养，将其镀入微板，以及应用的检测方案的复杂性。所谓的高含量检测是要求最高的，因为它们涉及荧光染料、蛋白质或探针的多路复用。
HCA主要使用CCD成像仪进行，但对于高含量筛选(HCS)，它们可能过于复杂，提供有限的吞吐量，并产生数据存储问题。激光扫描微孔板细胞仪，如Acumen Explorer，结合了CCD成像仪的物体识别能力和大量荧光阅读器的快速读取速度(通常<10分钟)。此外，96、384和1536孔微孔板可以在等效板读取时间进行分析，因为扫描是在一个区域而不是在井的基础上进行的。
蛋白激酶在许多细胞通路中起着重要的调节作用，如导致增殖、分化和凋亡的通路。因此，它们是药物发现研究的重要靶点，特别是肿瘤学研究。细胞中蛋白激酶活化的测量可以使用特定的抗体，需要应用多步染色方案。
在这里，我们模拟了Protedyne BioCube系统和Acumen Explorer的集成，用于实际的高通量、高含量的蛋白激酶筛选。集成细胞培养，化合物添加，免疫检测和分析的能力可达40,000孔/天，具有优越的过程控制。
1.利用Acumen Explorer荧光微孔板细胞仪进行高含量筛选 |
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关键特性 •快速读板时间(4 - 10分钟) •同时扫描96、384和1536个板 •小文件大小;筛选模式下到KB •在一次读取中多路复用多达4种颜色 •全井分析 |
Acumen Explorer是一款激光扫描荧光微孔板细胞仪，提供高含量筛选，与初级和二级筛选活动兼容。Acumen Explorer的精密光学系统为药物发现中的多重分析执行提供了无与伦比的全井扫描性能。 主要的生物学应用包括蛋白激酶活化的测定，细胞周期分析，以及引入Acumen Explorer 405 - β -内酰胺酶报告基因分析 |
2.在BioCube™系统上实现高含量筛选自动化 |
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关键特性 |
BioCube系统是一个先进的实验室自动化平台，将工业自动化实践带入研究实验室。BioCube系统是基于工业设计的四轴笛卡尔机器人，具有模块化、可互换的SmartTools和附件，以及灵活的数据库驱动软件架构。这使得系统除了高含量筛选外，还可以针对各种应用进行优化配置。 通过文件或直接的LIMS连接，可以提供关键的分析数据，并可以查询和检索结果信息。这使得Acumen Explorer的输出数据能够被反馈，并以闭环方式用于二次样本命中选择或在线实时质量控制。 |
3.利用抗磷酸激酶抗体对蛋白激酶活化的高含量分析 |
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在CHO细胞中通过其上游激活物MEK磷酸化激活ERK。使用phospho-p44/42 MAP激酶抗体(CST #9101)和山羊抗兔FITC抗体(Jackson;111-096-045)。细胞用碘化丙啶反染色。Acumen Explorer软件的井眼图显示控制井(左)和fcs处理井(右)。Acumen Explorer分析整个井的能力允许对总细胞数量的反应进行标准化，并补偿井内可变的细胞生长或激酶刺激。 |
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4.使用BioCube系统和Acumen Explorer自动蛋白激酶筛选 |
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估计工作表现(每24小时) 高含量筛选配置 |
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