高效高通量转染
成功的RNAi实验和大规模siRNA筛选需要高效地将高功能和特异性的核酸(包括siRNA寡核苷酸、shRNA载体或微rna)递送到适当的细胞系统中。与免疫研究相关的细胞类型,如原代T细胞和几种悬浮细胞系,很难使用基于试剂的方法获得
转染方法。
Nucleofection®是一种有效的、非病毒的核酸转染到难以转染的细胞类型(包括原代细胞)的方法。随着技术扩展到96孔格式(图1),高通量应用,如siRNA或shRNA文库筛选现在可以在这些细胞类型中进行,从而在与医学研究高度相关的细胞类型中进行目标验证和识别。将96口井的Shuttle®集成到液体处理工作站中,实现了完全自动化的筛选方法。
使用高功能的Dharmacon siGENOME®siRNA试剂和96孔nucleofection®的强大组合,我们在这里展示的数据显示在各种细胞系和原代细胞中有效的siRNA介导的基因敲除。
我们的研究重点是Jurkat t细胞,这种细胞来源于人类急性t细胞白血病,广泛用于t细胞信号的研究和癌症药物的开发。
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