在多参数高含量测定中使用阵列合成CRISPR RNA文库鉴定参与细胞周期调节的基因

在这里，我们使用细胞周期报告细胞系进行了一种阵列的合成crRNA:tracrRNA筛选，靶向169个基因，每个基因有4个crRNA，使用高含量分析(HCA)来识别调节细胞周期的基因。采用多种参数将细胞分为不同的细胞状态和细胞周期阶段:细胞核形状不规则的细胞、G1期的细胞、S期或G2期的细胞、有丝分裂或染色质浓缩的细胞以及多核DNA成分的细胞。我们使用了一种新的统计方法进行命中鉴定，并应用多种策略，包括基因表达分析、基因组插入和删除的确认以及正交试剂验证，以鉴定在细胞周期调控中起作用的高可信度靶基因。大多数命中的每个靶基因都有多个阳性crrna，能够高可信度地识别靶基因，证明了将合成crrna文库与HCA测定相结合，以阵列形式筛选复杂细胞表型的能力。考虑到将rna转染到大多数细胞类型中很容易，我们预计许多表型分析都适用于合成crRNA文库的阵列筛选。