改善小RNA图书馆工作流程准备下一代测序

下一代测序(上天)是用于分析小分子核糖核酸(microrna),小非编码rna是重要的治疗目标和诊断标志物。商用小RNA序列库制备包需要大量输入(> 100 ng)和一个艰难的凝胶净化步骤,不适合自动化。另外商业工具适配器却阻碍了二聚体的形成,在5΄和3΄没有一个RNA干预插入适配器结扎。适配器二聚体优先在PCR扩增放大。这是加剧了RNA在低输入适配器二聚体可以大大减少可用的序列读取。当前适配器方法二聚体抑制不足以允许排序非常低的输入量和需要一个凝胶净化步骤移除适配器二聚体。相比之下,我们描述一个抑制适配器二聚体的优化工作流程,允许RNA输入到1 ng和消除需要一个凝胶纯化步骤。我们工作流程介绍了化学改性适配器允许高效的图书馆结扎而抑制适配器二聚体的形成。TriLink RNA的修改工作流适配器允许输入低至1 ng不到1%适配器二聚体凝胶纯化时读取。此外,改进的工作流使用磁bead-based大小选择允许自动化以前不可能的。