长期使用核基因沉默在哺乳动物细胞

文摘
基因沉默使用siRNA-mediated RNAi在细胞生物学已经成为一个强大的工具,解决一系列在功能基因组学和药物发现研究问题。分娩后的核细胞,快速目标信使rna的降解可以发现,通常在24小时内,随后相应的蛋白质也撞倒了。

这击倒是短暂的,尤其是在处理细胞系增殖的细胞内的核与每个细胞分裂是稀释。因为大多数细胞系亚文化大约每周两次,siRNA-mediated RNAi实验通常是分析转染后3 - 4天。在许多情况下,这种短期的可拆卸的过于简短和表型的影响,需要一个长期的可拆卸的靶蛋白不能检查。

我们已经开发出一种协议,它允许在哺乳动物细胞基因沉默超过2周。核转染使用lipid-based HiPerFect转染试剂每次细胞稀释和镀板到一个新的文化。