使用3D培养模型的基于细胞的多重分析

3D细胞培养模型的物理性质和大小与在塑料表面单层生长的细胞有很大不同。如果在更大的3D结构中发生不完全的细胞裂解或不完全的试剂穿透，应用最初设计用于单层细胞的现成商业检测试剂可能会导致伪影。这些问题可能会进一步放大，当试图结合(多重)不止一种化验化学审问由3D细胞结构组成的同一样品。我们设计了改进的细胞健康检测配方和方案，以克服分析3D培养模型时遇到的一些问题。我们还测试了在使用悬滴法形成的单个球体的相同样品上组合/复用不同的测定组合。我们结合了一种新的实时细胞活力测定方法:使用DNA结合染料测量细胞死亡，测量萤火虫荧光素酶报告活性以检测细胞应激事件，提取RNA以进行基因表达分析。将描述验证每种多重检测组合所需的参数以及每种方法的优缺点。