NanoBRET™化验监测蛋白质在活细胞的相互作用

确定小分子调节器、抑制剂或活化剂,蛋白与蛋白相互作用(PPI)仍然是具有挑战性的,很大程度上是由于开发健壮的困难,大规模筛选工具,可以用来询问这些相互作用在一个生物相关的上下文。生物荧光共振能量转移(BRET)已经被用于监控实时蛋白质:蛋白质在活细胞的相互作用,但当前方法受到有限的灵敏度和动态范围窄。这里我们提出一个新的BRET方法,称为NanoBRET,基于一个小和非常明亮NanoLuc HaloTag——长波长荧光团的荧光素酶耦合。这种高效能源新的组合增强BRET性能,和更高的灵敏度可以促进应用程序的方法在高密度板和高通量筛选。这里我们提出几个蛋白质相互作用的例子可以审问NanoBRET包括表观遗传生物学交互,适配器招聘膜受体,蛋白酶体招聘目标蛋白质的降解。