新方法通过微流控高通量测量的复制寿命酵母大小排序和基因工程

酿酒酵母已被确立为衰老模型系统研究了50多年。而时间寿命(CLS)被定义为一个非区分酵母细胞存活的时间,复制寿命(RLS)是指单个细胞分裂的次数才开始衰老。物质影响RLS是特别感兴趣的疗法的发展,抵消早期衰老和癌症。标准RLS测定酵母非常费力,需要母亲和女儿分离细胞每次分裂后通过显微操作技术。
我们在柏林与中小企业合作发展中筛选的微流控装置,使同时测试的影响各种药物的RLS酵母。为此,建立了一个药物敏感的酵母菌株的遗传背景美国酵母W303通过淘汰赛的三个主要耐多药转运体应变。母亲和女儿细胞大小蔡司荧光显微镜测量,并与棱镜软件数据进行评估。细胞将通过机械力固定在芯片上,和女儿细胞将由一种新型检测系统监控。
在第二个方法中,线性增长的酵母菌株通过daughter-specific选择性生成细胞周期基因的敲除。子细胞来完成细胞分裂的失败会导致老化的积累母细胞在液体培养,提供一个直接联系RLS和光学密度的增加。