三维球面分析在HTS药物发现方法中的进展

药物发现研究中抑制癌细胞增殖的研究还没有很好地从传统的二维(2D)体外实验转化为体内研究。大多数抗癌药物化合物的研究都是在经过组织培养处理的2D实验中进行的，目的是研究增殖、活力和凋亡。越来越多的科学证据表明，以三维(3D)球体的形式生长的癌细胞比2D细胞培养形式更能预测体内研究结果。通常，球体的生成方法多种多样，如u型底板、悬滴或半固体介质，球体生长的分析都是在显微镜下进行的，这种方法耗时、费力、低通量且缺乏再现性。文献报道了使用自动成像仪来监测96孔板中3D球体的大小和生长情况，其中球体在4天内从固定数量的细胞形成，并返回一致的球体大小。在这项研究中，我们强调使用384孔低附着u型底板结合Celígo®成像细胞仪成像和分析3D球体的形成，与96孔板相比，允许增加通量、重复数量和每个板的参数。384孔板中形成U87MG肿瘤球，随后进行影像学分析。对肿瘤球进行了21天的监测，成像仪报告了来自明场图像的定量测量，包括球的大小和动力学增殖。此外，还创建了粘附的2D板进行比较。报道了Z '因子稳健性和IC50值(3D和2D分析格式的Z '因子均为0.6,IC50分别为0.25uM和0.17uM)，表明可以在384孔板中形成可重复的3D球体。 Fluorescent studies were carried out with the imager for viability using intensity analysis. For compound screening methods, the assay was evaluated in comparison using various drug compounds that have shown anti-proliferative effects. Similarly reported with 17AAG data, comparison of IC50 data reported higher values in the 3D assay than in the 2D assay, (doxorubicin: 3D, 0.166uM and 2D, 0.049uM; TMZ: 3D, 15uM and 2D, 13uM), except in the paclitaxel response, where 0.012uM was reported for both assays. Together, these data demonstrate that the tumorsphere formation assay can be developed, validated and used for high-throughput anti-cancer compound screening in 384-well U-Boxall Fbottom low attachment plates using the Celígo Imaging Cytometer.