使用非修饰rna从人体血液、尿液和皮肤细胞中提取临床相关的iPS细胞系，使用gmp兼容试剂

2015年，我们发表了非修饰RNA技术在人类成纤维细胞和人血源性内皮祖细胞(EPCs)重编程中的独特应用。人类血液为重编程提供了方便的成年人类细胞类型。值得注意的是，EPCs可以从新鲜或冷冻的单个核细胞(MNC)制剂中克隆分离出来，只需要10毫升的人外周血或脐带血(图1B)。与通常分离的造血悬浮细胞类型相比，EPCs的粘附性和高增殖能力使它们非常适合重复转染RNA。此外，尿液取样可能提供了最非侵入性的细胞采集形式。尿液来源的上皮细胞(UDCs)仅可从30 mL尿液中高度重复性地分离出来(图1C)。在这里，我们提出了一种灵活而强大的基于rna的重编程方法，该方法将合成的、非修饰的重编程[OCT4, SOX2, KLF4, cMYC, NANOG和LIN28 (OSKMNL)]和免疫逃避mrna [E3, K3, B18]与来自302/367簇的重编程增强成熟双链microrna结合在一起。在RNA转染鸡尾酒中包含E3、K3和B18免疫逃避mrna，无需在重编程过程中向细胞培养基中补充重组B18蛋白。这种不同RNA的独特组合产生了高效和强大的重编程协议，仅使用gmp兼容底物(iMatrix-511和vitronectin)、培养基组合(无异种培养基或人血清补充物)和RNA来产生临床相关的iPS细胞(图2A-C)。RNA鸡尾酒中Oct4转录水平的升高导致转染方案在10天内有效地从人类成人和新生儿成纤维细胞(高达4%)、血液来源的EPCs(高达0.04%)、HUVECs(高达3%)UDCs(高达0.5%)中产生TRA-1-60阳性iPS细胞(图3 A-C和表1)。此外，这些不同的iPS细胞系表现出高度一致的心肌细胞、神经细胞和早期内胚层分化潜力(图4 A-C)。 The unique combined application of non-modified RNAs, using GMP-compliant reagents, for the cellular reprogramming of different human cell lines results in clinically-relevant iPS cells that are well suited for consistent application of in vitro differentiation protocols.