验证的基于图像的三维自然杀伤细胞介导细胞毒性试验

自然杀伤(NK)细胞是一种细胞毒性淋巴细胞在外周血中发现,在宿主防御和免疫调节中发挥作用。最近,NK细胞变得特别感兴趣的领域的目标免疫疗法由于其潜力并摧毁特定的癌细胞,同时保留着完整的非目标健康细胞。NK细胞的抗癌活动相关的已被证明是一个更好的预后几个癌症如结肠癌cancer1、非小细胞肺癌cancer2和透明细胞肾细胞carcinoma3。

为了正确地研究NK细胞和目标肿瘤细胞之间的相互作用,系统必须建立一个合适的体外模型。然而,迄今为止公布的数据使用镀癌细胞作为二维(2 d)单层微型板块井的底部。越来越多的数据表明,细胞培养以这种方式缺乏细胞:细胞和细胞:矩阵通信、代谢渐变和极性vivo4中演示。执行矩阵渗透的能力研究也消除了使用2 d细胞培养。通过将癌细胞嵌入到一个三维(3 d)矩阵,使肿瘤的形成球状体,或tumoroids,使用二维培养细胞的缺点是可以克服的,通信网络和细胞渐变内观察到体内肿瘤禁令。

结合了三维培养的细胞,然而,传统方法来监控目标和NK细胞相互作用,和随后的靶细胞杀死可以成为问题。标仪分析旨在检测信号从细胞层缺乏量化信号的灵敏度球状体包围non-cell包含地区和没有信号的一代。通过合并microscopy-based检测和细胞分析,仅从球状体发出信号量化,提供一个高度健壮的方法来检测目标肿瘤细胞内诱导毒性。

在这里,我们描述一个小说3 d NK细胞介导细胞毒性试验(CMC)。HCT116大肠癌细胞嵌入定义的胶原蛋白水凝胶浓度和厚度,模拟体内细胞外基质(ECM)。后细胞内创建tumoroids传播矩阵,HCT116与单个细胞和NK细胞标记追踪染料,其次是NK细胞增加。荧光细胞凋亡和坏死探针也添加到跟踪tumoroids内的细胞毒性事件。细胞成像和分析进行定期在七天时间内监控NK细胞绑定tumoroids和诱导细胞凋亡和坏死的每个tumoroid HCT116细胞组成。实验测试验证,结合检测技术提供了一个敏感、准确、可重复的体外方法确定目标和NK细胞的能力杀死肿瘤细胞。