液滴数字™PCR提高端粒酶活性的检测灵敏度分析

旧金山加利福尼亚大学的研究人员,Bio-Rad实验室,inc .)正在使用Bio-Rad ddPCR置入技术与染料化学提供绝对量化的端粒酶活性。

端粒,自然保护染色体末端的结构,降低每次细胞分裂。一旦低于临界长度,细胞被逮捕,成为衰老死亡或通过危机之前,招致额外的基因突变,并成为永生的癌细胞。

不朽的机制之一是端粒酶的激活。这种酶增加了端粒的特定的核苷酸重复序列,因此复卷时钟,使细胞不断分裂。研究人员正在研究端粒酶活性作为癌症诊断的生物标志物,作为抗癌药物的目标。测量端粒酶活性更敏感可能提高我们理解它的作用在肿瘤形成和其他细胞和生理表型。

ddPCR技术提高端粒酶活性测定
传统上,端粒重复扩增协议(陷阱)分析措施的存在活跃的端粒酶通过测量酶的活性在DNA模板开始,然后通过PCR放大。与丰富的端粒酶活性,样本SYBR®绿色qPCR化验提供高吞吐量和足够的灵敏度。然而,最敏感的检测方法仍然需要放射性标记,费力的聚丙烯酰胺测序凝胶和微。

在引用的研究中,单分子计算示例telomerase-extended模板是通过划分成水滴其次是由荧光PCR扩增和检测滴阅读使用Bio-Rad ddPCR技术。研究结果表明,ddPCR明显比传统的陷阱摄影更为敏感,也更适合高通量分析。

”这个新(ddPCR陷阱)端粒酶活性测定表明量化在液滴端粒酶酶活性的能力,”乔治·Karlin-Neumann说科学事务主任Bio-Rad生物学中心的数字。“ddPCR技术使测量的灵敏度的端粒酶活性低于传统的影像学方法的检出限样品,同时也提供一个快速和简单的方法测量细胞中端粒酶的高表达。