高吞吐量的肠出血性大肠杆菌病原体检查粪便样本使用罗氏´s麦格纳纯96和LightCycler®系统

在过去几周,有显著增加病例数与溶血性尿毒症综合征(HUS)相关的腹泻带血引起的肠出血性大肠杆菌(EHEC)。

到目前为止,超过3400例实验室确认的肠出血性大肠杆菌和溶血性尿毒综合征病例报道,39岁的致命的结果(罗伯特·科赫研究所的报告日期20.06.2011)。大多数的肠出血性大肠杆菌感染者生活在德国,但大量感染也被报道在瑞典,俄罗斯以及其他欧洲国家。

简化工作流检测肠出血性大肠杆菌感染细菌,核酸的自动化麦格纳纯样品制备系统隔离和LightCycler®实时PCR仪器从罗氏应用科学被用于高通量检测肠出血性大肠杆菌感染的病原体在初级粪便样本在这个流行。

在最近的一项研究(准备)由拉尔夫Bialek(实验室克劳斯博士与同事、MVZ GmbH基尔,德国),Udo Reischl(医学微生物学和卫生研究所大学医院的雷根斯堡,德国),和Olfert Landt编著(TIB的MOLBIOL GmbH,柏林,德国),使用高通量处理人类粪便样本麦格纳纯96工作站,隔离高质量总基因组DNA主要从粪便标本。

针对肠出血性大肠杆菌的毒素基因LightCycler®实时PCR试验表明,粪便标本中可以用作起始物料检测肠出血性大肠杆菌疫情感染减少至少隔夜孵化时间的转变。

使用的全自动机器人麦格纳纯96仪器,在这项研究中,分离出核酸从96年样本在大约一个小时。这个罗氏平台是一种有效的,具有成本效益的方法从大量的粪便样本准备模板DNA的流行情况。

随后LightCycler®480实时PCR被发现使用证明具体,准确和可重复的敏感PCR引物和探针,针对肠出血性大肠杆菌感染的志贺毒素基因,可作为LightMix®工具肠出血性大肠杆菌。

确保整个麦格纳的健壮性纯96和LightCycler®肠出血性大肠杆菌测试工作流程,建立了一个新的病原体通用协议使用200µl样品体积和100年µl洗脱体积。

大肠杆菌志贺毒素基因放大的两双荧光标记杂交探针定位stx-1 stx-2,其次是LightCycler®系统融化曲线分析识别毒素基因亚型。

细菌基因帕洛阿尔托研究中心(肠杆菌科的第四拓扑异构酶亚基编码)是用作提取控制证明中提取DNA的存在和排除PCR抑制剂。系统测试的工作流程应该大大有助于未来的肠出血性大肠杆菌感染的早期检测和监控,以及其他新兴细菌性传染病。

团队评估小说四色多路复用分析使用水解探针LightCycler®480仪器(出版物提交),针对两种毒素基因(stx1和stx2), wzx基因(标记为O104血清型),和一个内部控制。这个新试验使疑似样本的分析在一个反应,更快更划算time-to-result,爆发期间这是特别重要的,当许多样本必须在短时间内学习。