沃尔夫森Bioimaging设施Linkam阶段使用
Linkam科学仪器报告的使用温度可控阶段应用于克莱姆和荧光显微镜协助内吞作用的排序在布里斯托尔大学的生物化学学院。
保罗Verkade博士是一位读者在细胞成像在布里斯托尔大学的生物化学学院,他还头的电子显微镜单位沃尔夫森Bioimaging设施。他目前的研究重点是开发技术和工具的使用相关光电镜(CLEM)研究内吞作用的排序。
主席Verkade博士目前的电子显微镜部分皇家显微镜学会和低温显微镜集团主席,隶属于皇家社会显微镜。他还组织和教授一些课程和研讨会的主题如高压冷冻,相关光电镜(CLEM)和免疫EM,包括EMBO CLEM实践课程。
看着他的详细研究,Verkade博士讨论他的工作。“我组小说的研究细胞内隔离过程,尤其是内吞作用的系统(如隔离回收货物远离降解)。为了研究这些过程,我们使用大量的光学显微镜实时地了解这些动态事件。
然而光学显微镜的分辨率太低了形象化的某些方面(如回收膜小管直径约50 nm)。因此我们希望捕获特定阶段的实时成像和分析详细的电子显微镜在所谓相关光电镜实验。有几种方法来执行这些实验,我们使用在两个工作流Linkam阶段。”
“为了保护本地的超微结构条件下,我们必须迅速冻结我们的样品(例如,化学固定破坏膜小管)。然后我们可以检查这些冰冻的状态和荧光样品使用Linkam CMS196——相关显微镜阶段(样本图像所示)。如果样品是好的,我们可以进一步处理它,经常使用低温TEM或执行冻结替换和树脂包埋。这将是有趣的提到Linkam非常合作制作特殊的适应性,在我们的案例中修改网格盒架,以适应更厚的样品,我们已经获得了使用高压冷冻,而不是标准的EM网格”。
“第二个Linkam阶段,我们使用一个冷却阶段。这是用于我们的“photo-conversion”显微镜,照亮我们的荧光样品很严重我们创建氧自由基,可以变成一个电子致密沉淀。然而,如此多的光在我们的样品我们热。没有有效的冷却样品使用水冷Linkam阶段,我们会燃烧我们的示例,它会融化/爆炸。再一次,这是一个重要的工具在我们CLEM工作流”。
