CRISPR干扰

CRISPR干扰(CRISPRi)是一种新的基因敲除方法。这是没有切割的CRISPR。Horizon CRISPRi系统使用失活的Cas9核酸酶(dCas9)与我们专有的SALL1-SDS3抑制因子结构融合，在不切割DNA的情况下阻断靶基因的转录。Horizon CRISPRi系统需要两个组成部分:融合抑制蛋白(SALL1和SDS3)的特化dCas9，以及专门设计用于靶向基因转录起始位点(TSS)下游区域的引导RNA。该指南与dCas9-SALL1-SDS3结合，并将复合物引导到DNA靶位点。地平线提供慢病毒和瞬态方法，既抑制蛋白和引导引入。原生Cas9 dna切割功能已被点突变所消除，失活的Cas9 (dCas9)蛋白已通过融合Horizon专有的SALL1和SDS3抑制子结构域进一步设计用于基因抑制。地平线发现在创建dCas9-SALL1-SDS3融合之前测试了许多抑制因子结构。虽然目前许多CRISPRi系统依赖于dCas9- krab变体(Gilbert等人，2013年，Yeo等人，2018年，Moghadam等人，2020年，Alerasool等人，2020年)，但我们的新型抑制因子与dCas9蛋白共价连接，通过招募参与染色质重塑和基因沉默的蛋白质进一步抑制靶基因转录(Alland等人，2002年)。结果是产生了一种功能广泛的抑制因子，可以降低基因表达，但不会关闭。 CRISPRi dCas9-SALL1-SDS3 is available as mRNA for transient expression or in lentiviral particles for creating a stable dCas9-SALL1-SDS3 expressing cell line.