CRISPR和基因组编辑——多媒体

本构tnf表达是恶性卵巢表面上皮细胞的特征。Adenoviral突变体基因治疗载体蕴含着巨大的希望,但是他们的功效是由炎症级联tnf策划的阻碍。我们发现交付tnf shRNA卵巢癌细胞使用溶瘤腺病毒可以减少炎症级联由腺病毒和癌细胞也有直接抗肿瘤活性。

使用基于主要细胞RNAi应用如目标识别或验证,需要一种高效转染技术结合一个可靠和健壮的自动化系统。完成这些要求我们综合amaxa 96 -航天飞机在Tecan自由EVO®®细胞转染工作站基于Tecan自由EVO®液体处理平台,包括所有必需的组件和特性无人细胞转染。

成功的RNAi实验和大规模siRNA屏幕需要有效地交付高功能和特定的小干扰rna寡核苷酸、核酸包括shRNA向量,或微rna到一个合适的电池系统。细胞与免疫相关的研究,如原发性T细胞和一些悬浮细胞系,甚少使用reagent-based转染方法。

的amaxa Nucleofector®技术是一种被广泛接受的方法有效,病毒性任何核酸底物为hard-to-transfect细胞的转染,特别是悬架和主细胞。与Nucleofector®96 -航天飞机®系统高吞吐量的应用,如siRNA-library首次放映已经可以在这些细胞类型。这使目标验证和识别可能在细胞高度相关的生物医学研究。在这里,我们说

我们演示siRNA转染过程的优化时间和成本在高吞吐量的应用程序的两个独立的测量RNAi效应:Eg5表达和定量PCR的视觉监控测量GAPDH信使rna转染后的海拉细胞。结果显示,1清洗周期是充分的去除任何残留的可支配的转染复杂技巧,技巧可重用。

为了识别宿主基因所需的结核分枝杆菌感染和毅力,我们开发了一个表型细胞测定小鼠和人类细胞和适应高吞吐量和内容筛选的目的。最低的效率80%以上是实现“hard-to-Transfect”巨噬细胞细胞。验证试验的执行与控制siRNAs将讨论。

未经成绩单,包括反义、非编码基因间,和潜在的监管rna,被确定在三个不同的真核模式生物的cDNA克隆和测序。快速双链cDNA一代系统将被描述。

随着生产的转基因组织通力(GMOs)女士,快速检测系统是必需的。微阵列提供了一个合适的和节省时间的方法。我们的目标是发展转基因生物的DNA微阵列检测。

我们已经开发出一种转染试剂,HiPerFect转染试剂,它允许高效的基因与核浓度从1 nM-10 nM击倒,取决于使用的细胞类型和核。HiPerFect转染试剂测试和验证了许多细胞类型,包括主要的细胞。有效的可拆卸的主要细胞表明HiPerFect转染试剂确保低细胞毒性水平。

基因沉默使用siRNA-mediated RNAi在细胞生物学已经成为一个强大的工具,解决一系列在功能基因组学和药物发现研究问题。分娩后的核细胞,快速目标信使rna的降解可以发现,通常在24小时内,随后相应的蛋白质也撞倒了。